逆转录病毒载体介导的IFNα基因转移协同ATRA诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

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视黄酸(RA)为维生素A的活性代谢产物,具有广泛的生物学功能,已被广泛应用于临床治疗各种癌症,包括急性早幼粒白血病(APL)。RA对白血病的作用完全不同于传统的化学疗法,它并不直接杀伤肿瘤细胞,而是诱导其获得重新向成熟细胞分化的能力,且无骨髓抑制现象。但近年来发现有些病例对全反式视黄酸(ATRA)治疗不敏感,或维持显效时间短,而且用ATRA治疗取得临床疗效的同时也伴随着明显的毒副作用,这严重影响了ATRA的临床应用。因此,研究解决RA的耐药和毒副作用,提高APL治疗效果有很重要的临床意义。许多研究表明,联合用药可能是克服毒副作用的一个有效途径。体内、外的研究都证明RA和IFN联合能增强二者诱导分化、抑制增殖、抗病毒等活性。临床上,RA和IFN联合治疗头颈部癌症和其它类型的实体瘤已经取得了满意的疗效。但长期全身大剂量应用IFNα存在严重的毒副反应。克服长期全身大剂量应用IFNα所带来的毒副反应的方法之一就是利用基因转移的方法直接将IFNα基因导入肿瘤细胞内,使其在局部分泌IFNα。为了探讨IFNα基因转移与ATRA诱导APL细胞分化并促进凋亡的协同作用,本研究选择了对视黄酸类药物比较敏感的HL-60细胞株作为实验对象,以逆转录病毒载体pLXSN-IFNα5经PA317细胞包装后感染HL-60细胞,并经RT-PCR检测有IFNα表达后,用ELISA检测其IFNα的分泌量,再以ATRA作为处理因素,用流式细胞仪、Western blot、逆转录聚合酶链式反应等实验方法,从细胞增殖、细胞周期变化、细胞凋亡及凋亡相关基因(Fas、Bcl-2、Caspase-3)表达的变化等方面进行研究。实验结果显示:①逆转录病毒载体介导IFNα在HL-60细胞中高表达,分泌量为95ng/ml/10~6个细胞o4h。②ATRA对 IFN a高表达的 HL60细胞的增殖抑制及诱导分化作用显著增强。③HL-60细胞中高表达的 IFN a通过协同 ATRA上调节 Fas、Caspase刁的表达,抑制Bcl上的表达,促进ATRA诱导HL*0细胞凋亡。 上述研究结果提示:通过逆转录病毒载体介导使 IFN a在 HL*0细胞中高表达,ATRA与 HL.60细胞中高表达的 IFN a协同作用增强 ATRA的疗效,可能是预防和克服ATRA抗性,减轻ATRA毒副作用的有效途径之一,这为临床合理应用联合用药,克服ATRA的耐药性,减轻副反应提供了实验依据。
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