论文部分内容阅读
葡萄根瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae Fitch),是全世界分布的葡萄害虫,也是我国重要的检疫性生物,以若虫和成虫吸取寄主植物汁液,引起叶瘿或者根瘤,严重危害葡萄生产。嗅觉功能对昆虫寻找寄主、选择栖境、逃避不良环境至关重要。气味结合蛋白(OBPs)和化学感受蛋白(CSPs)等嗅觉蛋白是昆虫嗅觉活动的分子基础。通过研究葡萄根瘤蚜的气味结合蛋白和化学感受蛋白,可进一步研究葡萄根瘤蚜和寄主植物的关系,从而为进一步研究葡萄根瘤蚜的防治提供新思路。据此,本研究利用葡萄根瘤蚜转录组,对葡萄根瘤蚜的气味结合蛋白和化学感受蛋白进行了鉴定和序列分析,研究了这些嗅觉蛋白的组织分布。研究结果如下:1.从葡萄根瘤蚜转录组中鉴定得到7个OBPs和7个CSPs基因。分别提取葡萄根瘤蚜全虫、头部和胸腹部的RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物,以全虫cDNA为模板,通过PCR扩增获得OBPs和CSPs基因的开放阅读框。PCR产物经纯化、克隆到PMD-19t克隆载体并测序。测序结果表明,我们成功获得了7个葡萄根瘤蚜OBPs(DviOBPs)和7个葡萄根瘤蚜CSPs(DviCSPs)的开放阅读框序列全长。2.将得到的7个DviOBPs和7个DviCSPs分别与其他蚜虫的OBPs、CSPs进行序列比对。DviOBP1、DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4和DviOBP7具有6个保守的半胱氨酸位点,属于Classical家族OBPs;DviOBP5和DviOBP6在第6个保守半胱氨酸位点下游具有一个额外的保守半胱氨酸位点,属于Plus-C家族OBPs。CSPs包含4个保守的半胱氨酸残基。这些半胱氨酸残基与二硫键的形成有关,能够稳定CSPs的空间结构,形成一个疏水性的空腔。3.通过RT-PCR检测了DviOBPs和DviCSPs在葡萄根瘤蚜头部和胸腹部上的表达。结果表明,DviOBP1和DviOBP6在头部大量表达,在胸腹部中的条带较浅,DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4、DviOBP5和DviOBP7在头部和胸腹部均检测到明显条带;CSPs在头部和胸腹部上均有表达。