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伪狂犬病(Pseudorabies,PR)由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的主要特点为高度接触性、传染性;多种家畜和野生动物均可感染此病,主要症状为发热、奇痒(除猪外)、脑脊髓炎等。不同生长时期的猪都可以感染PRV,其主要临床症状是引起妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎;哺乳仔猪感染后可引起神经症状,最终死亡,死亡率几乎高达100%。从1947年刘永纯从猫体内分离到PRV,便证明我国存在伪狂犬病毒,目前全国超过20多个省市相继报道发生了该病。自2013年秋季以来,在河南、吉林、黑龙江等多地区使用PRV基因缺失苗(g E缺失苗)免疫的猪场出现疑似PR病例,本试验使用PCR技术对河南部分地区的伪狂犬流行情况做了调查与分析,分离并鉴定了PRV河南流行株,进行了g E、g C全基因测序及分析等研究。应用PCR技术,对2013年8月至2015年4月间的74个猪场的308份疑似病料进行检测,阳性率为27.8%;猪场阳性率为54%。对检测结果进行区域性分析,豫中地区的样品阳性率最高,为40.1%;豫南地区的样品阳性率最低,为17.3%;豫东、豫西和豫北地区的样品阳性率分别为25.6%、24.5%和30.2%;对河南不同地区的PRV阳性猪场进行统计,豫北地区的猪场阳性最高,为66.7%;豫南地区的猪场阳性率最低,为41.7%;豫东、豫西和豫中地区的猪场阳性率分别为56.5%、45.4%和57.9%。对送样时间进行相关性分析,2014年10月-11月所送检的样品阳性率最高,为36.1%;2013年8月-10月的所送检的样品阳性率最低,为16.6%;对季节相关性进行统计分析,春冬两个季节的阳性率较高,分别为30.9%、28.9%;夏季和秋季的阳性率相对来说较低,分别为22.9%、27%。将PCR检测为阳性的病料接种ST细胞,分离到6株PRV,分别命名为YZ、SMX、BP、WZ、WY、YY。6株病毒均能在ST细胞上出现较稳定的CPE,且均能扩增出特异性g E基因片段(429bp),全部分离病毒均传至第7代;进行毒力效价测定,所有病毒毒力效价基本稳定在105.6TCID50/0.1m L~108TCID50/0.1 m L。将6株PRV分别接种6周龄雌性小鼠,所有毒株均能致小鼠死亡。参照Gen Bank中发表的g E基因序列(AF171937),使用引物设计软件Primer5.0设计了1对引物,扩增7株PRV野毒株的g E全基因片段,克隆到克隆载体p MD?19-T中,并对其序列进行测定,以及g E基因序列分析及进化分析。结果显示7株分离株之间的同源性较高介于99.8%~100%,其中分离株BP与JZ以及SMX与WY两对之间的同源性均为100%,其余分离株的同源性介于99.8%~99.9%。参照Gen Bank中发表的g C基因序列,使用引物设计软件设计了1对引物,扩增7株伪狂犬野毒株的g C全基因片段,并对其序列进行测定及分析。7株分离株之间的同源性介于99.4%~99.8%,而与其他国内外参考株的同源性介于92.5%~100%。其中本试验分离株YY与YZ、JZ的同源性最高,均为99.8%,而JZ、SMX、WY三株分离株分别与BP、WZ的同源性均为分离株同源性最低,均为99.4%。