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本论文以宁夏枸杞总黄酮为研究对象,采用传统提取法、超声波提取法和微波提取法进行提取,并对这些提取方法进行了比较研究及实验优化,继而采用不同的方法对枸杞总黄酮粗提液进行了纯化并选择确定了最适宜的纯化方案。旨在建立一套高效、快速的提取、纯化枸杞总黄酮的技术路线,为后续宁夏枸杞黄酮类化合物的高效液相色谱指纹图谱的建立奠定基础。此外,我们还运用三种方法对枸杞总黄酮的抗氧化活性进行了初步评价。主要内容和研究结果如下:
以枸杞总黄酮提取率为指标,采用回流法、超声波法、微波法提取枸杞总黄酮,同时对超声波法及微波法进行正交试验优化,比较三种方法在最适宜条件下所得黄酮的提取率。结果表明微波法提取总黄酮提取率最高,其最适宜提取条件为:在温度100℃,固液比1∶20,火力为3的条件下提取2次,每次30min。与回流法及超声波法相比,微波提取法具有提取率高及节省时间等优点。
分别采用大孔吸附树脂、聚酰胺柱层析、硅胶柱层析对枸杞总黄酮粗提物进行纯化,比较三种方法的纯化效果,发现最适宜的纯化方法为大孔吸附树脂法。并从多种大孔吸附树脂中筛选出HPD600树脂用于精制枸杞总黄酮,继而通过实验确定其最适宜纯化条件,即上柱液浓度为0.414mg/mL,吸附流速为2BV/h,吸附效果最优;以50﹪乙醇溶液洗脱,洗脱率达到最高。
运用Folin-Ciocalteu法、DPPH法和羟基自由基清除法对脱脂及未脱脂的不同乙醇浓度的枸杞提取液的抗氧化活性进行测定。实验结果证实枸杞总黄酮具有较强的抗氧化能力,表明枸杞黄酮是宁夏枸杞不可忽视的主要活性成分之一;而且不同溶剂枸杞提取液抗氧化能力的差异也揭示枸杞的抗氧化能力是枸杞中水溶性和脂溶性多种活性成分协同作用的结果。
本文所建立的枸杞总黄酮提取、纯化技术路线简单、高效,易于推广,为宁夏枸杞黄酮类化合物的高效液相色谱指纹图谱的建立奠定了基础,也为工业化提取和纯化枸杞总黄酮奠定了基础。