目的:通过人工合成VEGF受体结合抑制7肽、基因重组表达VEGF受体结合抑制7肽与硫氧还蛋白(Trx)的融合蛋白Trx-RBIP,分析其生物学活性,探讨它们作为抗肿瘤血管新生药物的前景。 方法:利用噬菌体展示技术获得的VEGF受体结合抑制7肽的氨基酸序列,人工合成该多肽,通过细胞培养阻断实验检测其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用。将该短肽的基因插入质粒pET-32 a(+),与硫氧还蛋白(Trx)在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达;表达产物经过DEAE阴离子交换柱纯化后用肠激酶酶切;酶切产物利用6×His纯化标签,通过Ni柱亲和层析纯化;通过细胞阻断实验检测目的蛋白Trx-RBIP对HUVEC的抑制效果。 结果:人工合成受体结合抑制7肽与VEGFR有良好结合的能力,呈剂量依赖性抑制VEGF促HUVEC增殖的作用,最高抑制率达56.2%。成功构建表达载体pET-32a(+)_Trx_RBIP,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效胞内可溶性表达,表达的目的蛋白占细菌总蛋白的42%;DEAE阴离子交换层析纯化获得高纯度的产物,经肠激酶酶切获得到抑制肽N端游离的融合蛋白Trx-RBIP。Ni离子亲和柱层析纯化获得纯度较高的Trx-RBIP蛋白。细胞培养方法检测显示其对细胞HUVEC有良好的抑制作用,抑制效率可达24.9%。 结论:人工合成VEGF受体结合抑制肽及其硫氧还蛋白的融合蛋白Trx-RBIP,均能竞争结合VEGFR,阻断VEGF-VEGFR信号传导,抑制VEGF促HUVEC增殖的作用,具有进一步开发应用的前景。