【摘 要】
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本研究是在棉花枯萎病菌致病型鉴定的基础上,应用AFLP分子标记技术对新疆棉花枯萎病菌进行了遗传多样性研究,旨在了解新疆棉花枯萎病菌的遗传分化,并寻找病菌遗传分化和致病
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本研究是在棉花枯萎病菌致病型鉴定的基础上,应用AFLP分子标记技术对新疆棉花枯萎病菌进行了遗传多样性研究,旨在了解新疆棉花枯萎病菌的遗传分化,并寻找病菌遗传分化和致病性分化之间的关系;初步建立了棉花枯萎病菌的快速检测技术体系。主要研究结果如下:1.采用SDS-CTAB提取法、改良SDS提取法和试剂盒提取法提取棉花枯萎病菌基因组DNA,通过OD值测定和琼脂糖电泳检验,明确改良SDS提取法提取的棉花枯萎病菌基因组DNA适于AFLP分析。2.建立了适用于棉花枯萎病菌的AFLP反应体系,确定试剂盒所带TaqDNA聚合酶对预扩体系效果较好,并且预扩增产物稀释30倍适于做选择性扩增的模板;从64对EcoRI-MseI引物组合中,筛选到多态性丰富的11对引物组合,应用这11对引物组合对48个菌株进行遗传多样性分析,共扩增出306个条带,其中多态性条带117条,占38.23%;依据聚类树状图可以看出:新疆棉花枯萎病菌相似系数在0.26-0.96之间,说明新疆棉花枯萎病菌遗传分化较大,群体遗传多样性比较丰富。聚类分析表明,在相似系数为0.32水平上,新疆棉花枯萎病菌可分为三个类群,即AGI类群,包括1个菌株Fxj46,该菌株为8号生理小种的标准菌株;AGII类群,包括1个菌株Fxj45,该菌株为3号生理小种的标准菌株;AGIII类群包括46个菌株,该类群中包括7号生理小种的标准菌株和大部分鉴定为7号生理小种的菌株。基于AFLP划分的类群发现:AFLP类群划分与致病性鉴定划分的生理小种之间有一定的相关性,与菌株的地理来源、致病力的强中弱及7号生理小种内致病力强弱没有相关性;并且,新疆棉花枯萎病菌的遗传变异频率不大。3.应用特异性引物Fov1-Eg-f和Fov1-Eg-r对棉花枯萎病菌进行分子检测,该对引物对棉花枯萎病菌基因DNA的灵敏度检测可达到1pg/μl;并且在棉苗接种枯萎病菌12小时后,该对引物也能够从植株根部和茎基部DNA中都可扩增到约438bp特异性分子片段;但在棉花种子的种皮和种胚中未检测到棉花枯萎病菌;该方法对棉花枯萎病的早期、快速诊断及对病害的监测和预测预报有实际应用价值。
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