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目的探讨续断皂苷Ⅵ对大鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)向成骨细胞诱导的影响,并观察诱导后的细胞联合纳米羟基磷灰石/壳聚糖/柞蚕丝蛋白(n-hydroxyapatite/chitosan/tussah silk fibroin,n-HA/CS/TSF)人工骨材料修复大鼠桡骨缺损的效果。方法用酶消化法分离纯化SD大鼠ADMSCs,取传至第3代的ADMSCs,检测表面抗原CD31、CD44、CD49d、CD106的表达情况,MTT法检测ADMSCs的增殖活性。将传至第3代的ADMSCs的培养基中加入10μmol/L续断皂苷Ⅵ,诱导15d后,倒置显微镜观察细胞诱导后形态的变化,茜素红染色,免疫细胞化学检测诱导后细胞中骨钙素的表达,ELISA检测诱导后细胞中骨钙素的含量。将二元和三元支架与ADMSCs复合,并加诱导剂,3d,6d,9d,12d,15d后分别进行台盼蓝染色,观察细胞在支架的表面上的存活情况。骨缺损实验分组:(1)空白组,(2)ADMSCs组(细胞组),(3)ADMSCs和n-HA/CS复合组(二元复合组),(4)ADMSCs和n-HA/CS/TSF复合组(三元复合组),把诱导后15d的ADMSCs、诱导后15d的ADMSCs和二元、三元支架的复合物分别植入骨缺损处,空白组不加处理因素。术后第4、8、12W骨缺损区行X光拍片并按照改良Gary标准进行结果分析。取出桡骨,肉眼观察骨缺损的修复情况,并经常规HE染色,观察实各组新骨形成情况并按改良Nilsson的组织学评分标准进行成骨效应评估。用SPSS13.0统计软件对上述检测结果进行统计学分析。结果原代培养的ADMSCs贴壁生长,为形态相对均一的梭形细胞,呈平行生长,流式细胞仪检测高表达间充质干细胞相关标志物CD44,MTT法显示多次传代培养后,ADMSCs增殖能力没有明显降低。成骨诱导后的细胞呈三角形、矮方形及多边形,细胞彼此连接。茜素红染色可见钙沉积形成的散在红色阳性结节,免疫细胞化学检测表明骨钙素表达阳性,阳性细胞率85±5.22%。ELISA检测显示从诱导后第9d起,可检测到骨钙素的表达,随着诱导时间的延长,表达量增加。细胞和支架联合培养后,支架表面活细胞数随着诱导时间的延长而增加。术后4W空白组和细胞组骨缺损区可见低密度影,断端变钝,骨髓腔封闭,未见明显的新骨生成。二元复合组和三元复合组移植材料已部分吸收,三元复合组吸收程度高。术后8W二元和三元复合组皮质部分连续性恢复,骨痂密度高。术后12W三元复合组新生骨皮质恢复连续,明显厚于二元复合组,部分骨髓腔再通。改良Gary评分显示,在各个时间点空白组和细胞组无差异(P>0.05),三元复合组均高于空白组、细胞组和二元复合组(P<0.05),有统计学意义。空白组和细胞组骨缺损区各个时间点只有纤维组织,未见骨组织样结构。第4W三元复合组可见植入支架大部分被吸收,支架间隙和周围充满细胞,二元复合组支架的吸收较三元复合组的少,支架周围也有细胞分布。第8W二元和三元支架均已降解,可见有血管长入。第12W长入的血管增多,并出现类似骨单位样结构,三元复合组较二元复合组多,骨基质为淡粉色,较正常的骨组织淡,说明基质尚未成熟。改良Nilsson评分显示三元复合组在术后的4W,8W,12W均高于二元复合组、细胞组和空白组(P<0.05),有统计学意义。结论续断皂苷Ⅵ能够诱导大鼠脂肪间充质干细胞分化为成骨细胞,复合n-HA/CS/TSF三元支架能很好的修复骨缺损。