【摘 要】
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I、玉米缺铁相关基因fdr3的western与Southern blotting,fdr3是由缺铁诱导的坟 米根cDNA文库经差示筛选得到的阳性克隆之一.用IPTG诱导含有fdr3重组质粒的E.coli菌株,其表达
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I、玉米缺铁相关基因fdr3的western与Southern blotting,fdr3是由缺铁诱导的坟 米根cDNA文库经差示筛选得到的阳性克隆之一.用IPTG诱导含有fdr3重组质粒的E.coli菌株,其表达产物经SDS-PAGE分离后与铁相关抗血清进行western blotting,结果有一杂交区带.缺铁胁迫处理的坟米根可溶性蛋白经与同一抗血清进行western blotting,在40kD左右出现一杂交区带,对fdr3进行DNA序列分析,发现其中有一个1068bp的开放读框(ORF),这可能与western blotting检验的40kD蛋白区带在分子量上具有相关性.在GenBank中的同源性分 析表明它是一未知基因.其编码氨基酸序列的疏水性分析表明其中含有几个疏水结构域,表现出完整功能蛋白的结构特点.II、小麦NO<,3->-transporter基因片段的克隆与pGEX-2T-TaNRTl融合蛋白基因的构建.在前人实验的基础上,为了进一步研究小麦的高亲和NO<,3->-transporter基因TaNRTl(AF fragment),反从小麦根总RNA中,通过RT-PCR获得的高新和力NO<,3->-transporter基因片段与pBluescript-T质粒载体连接重组,经过克隆筛选、酶切 和测序分析,表明所构建筛选的重组体正确,其外源片段为657bp左右,并修正了前期PCR产物的AF片段的多处N碱基,接着,双从T-vector上切下构建到系列表达载体Pgex-1,2T,3X 上,经酶切及测序分析(只有pGEX-2T-TaNRTl测序了)表明构建的重组体结构正确.
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