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紫外线是导致皮肤老化的主要外源性因素之一,使皮肤表现为水分流失、弹性降低、泛红晒伤等,即皮肤光老化。随着消费者审美意识的提高以及对多功能化、天然化护肤产品需求的增加,胶原蛋白肽和天然抗氧化剂成为了学者的重要研究对象以及护肤产品的主要添加原料。胶原蛋白肽作为护肤产品的主体成分,其添加剂量直接影响口服护肤效果和经济成本。此外,天然抗氧化剂种类繁多,目前大多数研究停留在单一组分的评价、以及多组分的体外评价,缺乏体内横向比较。因此,本课题合理筛选出罗非鱼胶原蛋白肽的剂量、天然抗氧化剂的种类或组合,并进行复配,验证复配物改善皮肤光老化的效果,并初步探究其作用途径,以期为护肤产品的开发和原料复配方式选择提供理论依据。主要研究内容和结果如下:(1)不同剂量胶原蛋白肽抗皮肤光老化功效的对比研究:本章以BALB/c Nude裸鼠为实验对象,建立长期UVA+UVB联合紫外照射致皮肤光老化模型,设计低(600mg/kg)、中(1200 mg/kg)、高(1800 mg/kg)灌胃剂量,通过测定皮肤内源性组分、胶原合成与降解、炎症因子指标,并结合组织切片,综合评价不同剂量胶原蛋白肽对皮肤光老化的改善效果。结果显示,摄入胶原蛋白肽可激活与胶原蛋白合成有关的TGF-β/Smad通路相关因子表达,显著促进透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)、Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白合成,并下调基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)-1、3、12和上调其组织抑制剂(Tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)-1、2表达,减少白介素-1α(Interleukin-1α,IL-1α)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量(P<0.05),并改善皮肤组织形态。以上结果表明,摄入胶原蛋白肽可能通过激活TGF-β/Smad信号通路促进内源性胶原蛋白合成,并减少胶原蛋白降解,缓解机体炎症,从而改善皮肤光老化。其中,中剂量和高剂量效果较好,综合考虑实验结果和经济成本,优选中剂量胶原蛋白肽用于后续复配。(2)不同天然抗氧化剂抗皮肤氧化损伤功效的对比研究:本章建立短期紫外照射致皮肤损伤模型,通过测定氧化还原稳态、胶原降解、炎症因子和皮肤表型指标,对比评价石榴提取物(292 mg/kg/bw)、雨生红球藻提取物(103 mg/kg/bw)、针叶樱桃提取物(556 mg/kg/bw)、针叶樱桃提取物(556 mg/kg/bw)+维生素E(2.66 mg/kg/bw)这4种天然抗氧化剂或组合对皮肤氧化损伤的改善效果。结果显示,摄入天然抗氧化剂可促进氧化还原有关的Nrf2/ARE信号通路相关因子表达,显著减少活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、蛋白质羰基(Protein carbonyl,PC)含量,增加谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)表达,下调MMP-1、9、12表达,减少IL-6、TNF-α含量,降低皮肤a*值(P<0.05)。以上结果表明,天然抗氧化剂可能通过激活Nrf2/ARE信号通路平衡机体氧化还原稳态,进而抑制胶原降解,缓解炎症,改善皮肤表型,延缓皮肤光老化。其中雨生红球藻提取物、针叶樱桃提取物+维生素E的效果较好,优选用于后续复配。(3)胶原蛋白肽与天然抗氧化剂复配物抗皮肤光老化功效的验证研究:本章基于前两批动物实验结果,复配胶原蛋白肽和天然抗氧化剂,采用长期紫外照射致光老化模型,通过测定皮肤内源性组分、胶原合成与降解、氧化还原稳态、炎症因子、皮肤表型指标,并结合组织切片,验证复配物改善皮肤光老化的效果,并初步探究其作用途径。结果显示,复配物可激活TGF-β/Smad通路相关因子表达,显著促进HA、Hyp、Ⅰ型胶原蛋白合成;复配物还可激活Nrf2/ARE通路相关因子表达,显著减少ROS、MDA含量,提高GSH-Px、CAT表达,减少IL-1α含量,下调MMP-9和上调TIMP-1表达,降低皮肤a*值,提高水分,并改善皮肤组织结构形态。以上结果表明,复配物可能通过激活TGF-β/Smad通路促进胶原蛋白合成,并可能通过激活Nrf2/ARE信号通路平衡氧化还原稳态,改善皮肤炎症,进而抑制胶原蛋白降解,并改善皮肤组织形态与表型,在胶原合成和降解中具有一定互补作用。其中复配物3(胶原蛋白肽+雨生红球藻+针叶樱桃提取物+维生素E)效果较好。综上,本课题通过低、中、高剂量胶原蛋白肽抗皮肤光老化效果的对比,并结合经济成本,得出中剂量胶原蛋白肽较优;然后对比石榴提取物、雨生红球藻提取物、针叶樱桃提取物、针叶樱桃提取物+维生素E抗皮肤氧化损伤的效果,得出雨生红球藻提取物、针叶樱桃提取物+维生素E较优;最后复配优选的胶原蛋白肽剂量和天然抗氧化剂,得出中剂量胶原蛋白肽+雨生红球藻提取物+针叶樱桃提取物+维生素E效果较优,并初步揭示复配物抗皮肤光老化的作用途径可能与胶原蛋白肽和天然抗氧化剂的互补作用有关。