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目的本研究通过构建携带基质金属蛋白酶2特异性组织抑制剂(tissueinhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2)基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,观察其基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及TIMP-2的表达,以探讨形觉剥夺性近视基因治疗的可行性,为寻找有效的预防和控制近视发展的方法提供依据。方法随机选取三色健康豚鼠,雌雄兼有,组织块方法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取3-6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,脂质体转染豚鼠巩膜成纤维细胞12h、24h、48h、3d、5d、7d。采用MTT方法观察转染后细胞增殖能力,提取总RNA,二步法逆转录—聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染组与对照组比较转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用。转染48hMMP-2 mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少达到高峰,转染5d-7d虽然减少但幅度较前降低,除转染12h与24h之间外,各转染组间MMP-2 mRNA表达差别有统计学意义(P＜0.05)。转染48h时TIMP-2 mRNA表达即开始增加,转染3d时表达明显增加,转染5d-7d时表达继续增加,但增加的速率较前面降低,除转染12h与转染24h之间外,各转染组间TIMP-2 mRNA表达差别有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-2/TIMP-2mRNA表达平衡的失调在近视发生的早期起着重要的作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞能够抑制MMP-2 mRNA的表达,有可能会在一定程度上阻止近视发展中巩膜的组织丢失与重塑。