【摘 要】
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本课题从纤维素酶产生菌的筛选着手,通过建立有效的筛选模型和分析方法,得到一株活力较高的纤维素酶产生菌,经鉴定为烟曲霉ECU0811。与此同时,鉴于传统筛选方法工作量大,周期
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本课题从纤维素酶产生菌的筛选着手,通过建立有效的筛选模型和分析方法,得到一株活力较高的纤维素酶产生菌,经鉴定为烟曲霉ECU0811。与此同时,鉴于传统筛选方法工作量大,周期长,为了提高效率,作者在传统筛选技术的基础上,尝试通过等比例缩小菌株培养和酶活分析体系,建立了一种适合纤维素酶产生菌高通量筛选的实验方案,并经实验证明具有可行性。筛选得到的烟曲霉经过简单的产酶条件优化(碳源种类、浓度,最适初始pH,添加剂),使得酶活从0.23FPU/ml提高到0.41FPU/ml。经过发酵培养,离心取上清液,超滤浓缩及冷冻干燥,得到烟曲霉粗酶粉,比活为1.69FPU/mg。为了寻求更有效的纤维素糖化方法,本文在Genencor新上市的商品化纤维素酶AccelleraseTM1000的基础上,通过分别添加三种对AccelleraseTM1000有辅助作用的酶(杏仁籽糖苷酶、木聚糖酶、烟曲霉粗酶),考察多酶复配后的纤维素酶解效果。实验以蒸气爆破预处理的秸秆为底物,在酶解反应和产物测定过程中均采用高通量的96-孔板微量实验方法,极大地提高了工作效率,节约了物料消耗和时间成本。最后结合响应面分析方法,找到了玉米秸秆完全水解的最适酶组合的配比为：杏仁籽糖苷酶1.63mg蛋白/g葡聚糖,烟曲霉粗酶2.52mg蛋白/g葡聚糖,木聚糖酶7.85mg蛋白/g葡聚糖,AccelleraseTM100029mg蛋白/g葡聚糖。
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