盘状结构域受体(discoidin domain receptors,DDRs)属于一种受体型蛋白酪氨酸激酶,蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)是一大类介导细胞增殖或凋亡的相关信号转导分子。DDRs分子不仅与细胞增殖相关,还与细胞过分泌MMPs相关。它参与了许多细胞生理进程,如细胞增殖、分化、迁移和代谢,尤其是在控制软骨细胞增殖和骨骼生长中发挥重要作用。DDR2是类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)病理进程中起重要作用的分子之一。在RA滑膜细胞中,DDR2呈高表达状态,并具有较高的的磷酸化水平。它被胶原活化,介导基质金属蛋白酶(matrix metallo- proteinases,MMPs)的表达,MMPs作用于关节软骨,最终造成关节软骨不可逆的破坏。因此,本研究制备了Ⅱ型胶原-DDR2-MMPs这一信号通路的阻断剂,使其阻断DDR2介导的MMPs持续分泌,期望将来为临床上治疗RA提供新的候选药物。本研究主要取得了以下结果:1.成功构建了DDRs/IgG融和表达载体,并在HEK293细胞和CHO细胞中进行了表达鉴定。本实验对DDR2的DS domain与IgG的Fc段进行了融合表达,DS domain是DDRs结合其配体——Ⅱ型胶原的有效区域,之所以将它和Fc段进行融合,目的是利用Fc的二硫键使DDR2 DS domain形成二聚体,使其具备与Ⅱ型胶原结合的构象,通过竞争性结合Ⅱ型胶原而抑制它与天然受体结合,进而阻断Ⅱ型胶原-DR2-MMPs这一信号通路。2.利用CHO细胞表达系统,通过稳定转染和压力筛选,获得了强表达DDR2/Fc融合蛋白的单克隆细胞株。3.通过大量培养阳性细胞株,收集培养上清后,利用蛋白A亲和层析,对融合蛋白进行回收与纯化,结果表明蛋白表达量在1.14μg/mL(7.98μg/107cell)。4.经过竞争性结合抑制实验和细胞实验,证明制备出的竞争性阻断剂——DDR2/Fc融合蛋白在体外具备一定的阻断功能。5.构建了DDR2/Fc重组腺病毒载体,并初步包装了相关重组腺病毒,期望获得高滴度的重组腺病毒,用于感染RA动物模型进行动物实验。