铁皮石斛显微特征数量化及其与药材质量的相关性研究

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目的:以铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为研究对象,对不同实验处理不同生长年份样品的形态特征、数量化的显微特征和指标性成分的差异性进行研究,将其显微特征与药材质量进行分析,探索基于显微特征数量化进行质量评价的新方法及技术,为铁皮石斛鉴别与开发提供技术支持与实验基础。方法:1.实验分组:将同一种源铁皮石斛分3种模式进行栽培,分别简称为对照组(遮蔽度70%)、物理组(遮蔽度50%)、化学组(喷洒植物生长激素GA3);2.形态特征分析:用直接测量的方法对其形态特征进行测量;3.显微特征数量化分析:采用石蜡切片法,利用NIKON Eclipse Ni显微镜对铁皮石斛茎横切面显微特征进行微观测量;4.指标性成分分析:按照《中国药典》2015年版收录的方法测定其指标性成分多糖和甘露糖的含量;5.数据分析:运用SPSS23.0数据分析软件,分别探讨其指标性成分与形态特征、显微特征数量化的相关性。结果:(1)形态特征的研究结果显示,同一处理组(对照组、物理组、化学组)不同生长年份的铁皮石斛样品的株高、叶数、节数、茎粗、鲜重、干重、折干率等均存在差异。对同一生长年份不同处理组进行比较,物理组和化学组的节间长度、茎粗均高于对照组,其中物理组三个年份样品的平均茎粗均是最大的,一年生为5.56cm,二年生为5.13cm,三年生为6.00cm;物理组三个年份样品的叶数均高于对照组,化学组三个年份样品的株高和鲜重均高于对照组。(2)显微特征数量化研究结果显示,在同一处理组中,横切面维管束占切面积百分比、坚硬结构占切面积百分比大小均为:二年生>三年生>一年生;在二年生样品中,喷洒植物激素可使茎横切面维管束及坚硬结构含量减少,而光照增强其横切面维管束及坚硬结构含量升高;在化学组二年生样品横切面维管束占切面积百分比、坚硬结构占切面积百分比最低,平均值分别为1.88%、1.67%。(3)成分测定结果显示,同一生长年份,不同处理组样品甘露糖含量存在显著性差异(P<0.05)。在三个处理组中二年生样品的多糖和甘露糖含量都达到了《中国药典》规定要求;其中,对照组二年生样品甘露糖含量最高,其含量为25.37%;化学组二年生的多糖含量最高,达到38.13%。(4)相关性分析结果显示,在形态特征与指标性成分相关性分析中,不同处理组多糖、甘露糖含量与铁皮石斛节数、干重呈正相关(r在0.721-0.999之间);在显微特征数量化与指标性成分相关性分析中,不同处理组多糖、甘露糖含量与铁皮石斛横切面维管束占横切面积百分比、横切面坚硬结构占横切面积百分比呈负相关(r在0.793~1.000之间)。结论:通过对数量化的显微特征、形态特征、多糖、甘露糖含量等进行比较研究,得到不同处理组不同生长年份的铁皮石斛品质差异,为铁皮石斛的鉴别与开发提供科学依据。使用显微特征数量化定量技术与方法,可以测定与药材质量相关性的数据,为铁皮石斛的鉴定及质量控制研究提供新的技术手段。创新点:1.首次对铁皮石斛显微特征与药材质量的相关性进行研究,并提供了显微特征量化与其多糖、甘露糖含量变化相关性的实验数据。2.采用显微测量方法,结合显微镜图像处理软件对比分析茎横切面的显微特征,创新了铁皮石斛显微鉴定的技术与方法。3.提供了铁皮石斛形态特征、显微特征、指标性成分的相关性分析的技术,得到了科学结论。(见附件“铁皮石斛显微特征数量化及药材质量的相关性研究科技查新报告”编号CX2018068)。
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