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目的观察MIMP对炎症性肠病小鼠的肠道炎症及肠道微生态的影响;探究MIMP对炎性细胞因子的作用效果和调节方式,并探讨相关作用机制。方法(1)将小鼠分为3组:DSS+MIMP组,DSS组和健康对照组。干预期间,观察小鼠体重变化情况,腹泻、血便、死亡等发生率,观察各组小鼠肠道整体情况并制作H&E染色切片,观察肠上皮组织病理学的改变;利用右旋糖苷异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-Dextran)灌胃,检测小鼠活体肠道通透性,并利用蛋白质印迹(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测各组小鼠肠道上皮中紧密连接蛋白(JAM-1,Occludin,ZO-1)的表达水平;利用q RT-PCR检测各组小鼠肠道上皮中炎性细胞因子(IFN-γ,IL-17,IL-23,IL-4,IL-10)的表达,利用16Sr RNA测序技术检测各组小鼠肠道微生态的变化情况。(2)利用类小肠上皮细胞的Caco-2细胞和外周血单核细胞(PBMCs)在Tranwells条件下建立共培养模型,利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为炎症刺激,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测MIMP在不同浓度及不同孵育时间下对肠道微环境中炎性细胞因子(IFN-γ,IL-17,IL-23,IL-4,IL-10)的调节情况。利用ELISA和q RT-PCR检测TLR4抑制剂对LPS介导的炎性细胞因子分泌水平的影响,并与MIMP的作用效果相互比较。利用Western blot检测MIMP和TLR4抑制剂对MAPK及NF-κB通路的调节情况,并利用双荧光素酶报告基因实验检测MIMP在不同浓度及不同孵育时间下对NF-κB活性影响的变化趋势。(3)利用Western blot检测MIMP及TLR4抑制剂对由LPS介导的Caco-2细胞整体水平的组蛋白(H3,H4)乙酰化的调节情况,利用染色质免疫共沉淀技术(Ch IP)技术检测MIMP在不同浓度及不同孵育时间下对具体水平的IL-17及IFN-γ上游启动子区域组蛋白(H3,H4)乙酰化的调节情况;利用q RT-PCR检测MIMP对LPS介导的组蛋白去乙酰化酶(histone deaceylase,HDAC)表达水平的调节情况。结果(1)与DSS组小鼠相比,MIMP+DSS组整体情况较好,体重减轻程度轻,腹泻、便血及死亡发生率低,疾病活动指数显著下降;MIMP不但可以改善肠道整体情况,提高肠道长度(p<0.05),还可有效提升组织学评分(p<0.001);MIMP+DSS组血浆中FITC-Dextran的含量显著低于DSS组(p<0.01),而肠上皮中紧密连接蛋白(JAM-1,Occludin,ZO-1)的表达水平则显著高于DSS组(p<0.01)。此外,MIMP可降低肠道上皮中促炎性细胞因子(IFN-γ,IL-17,IL-23)的水平,并升高抑炎性细胞因子(IL-4,IL-10)的水平。16Sr RNA测序发现MIMP+DSS组较DSS肠道微生态多样性显著提升,shannon指数显著降低(p<0.05),simpson指数存在一定上升趋势(p=0.055);主坐标分析(principal coordinate analysis,PCo A)提示三组小鼠肠道微生态在各分类学水平上存在明显差异;样本聚类树与柱状图组合分析(The sample clustering tree and histogram analysis)提示MIMP+DSS组与健康对照组肠道微生态的相似程度更高;线性判别分析(LEf Se)分析显示厚壁菌属(Firmicute)是DSS组小鼠肠道中的优势菌属,明串珠菌属(Leuconostocaceae)是DSS+MIMP组的优势菌属,拟杆菌属(Bacteroides)是健康对照组肠道中的优势菌属。(2)在共培养模型中,MIMP可扭转因LPS引起的炎性细胞因子的分泌,降低促炎性细胞因子(IFN-γ,IL-17,IL-23)的水平,升高抑炎性细胞因子(IL-4,IL-10)的水平;且MIMP的调节存在一定的剂量与时间依赖性,在特定浓度和时间时(1ng/ml,12h),MIMP的作用效应最为显著;同时抑制性实验证实MIMP与TLR4抑制剂具有相同的调节炎性细胞因子的能力;此外,MIMP和TLR4抑制剂均可有效阻断MAPK及NF-κB通路激活,且随着MIMP剂量的提高和时间的延长,NF-κB的活性也呈现阶梯状下降趋势。(3)LPS可使得组蛋白(H3,H4)整体水平的乙酰化程度提高,而MIMP与TLR4抑制剂干预可有效降低其乙酰化程度,并存在剂量依赖性;在具体水平中,随着剂量的提高和时间的延长,MIMP可有效降低IL-17和IFN-γ上游启动子区域组蛋白(H3,H4)的乙酰化程度;同时,MIMP还可以显著上调部分HDAC的表达。结论MIMP可有效改善IBD小鼠的炎症状态及肠屏障功能,显著下调促炎性细胞因子的表达,上调抑炎性细胞因子的表达,并纠正IBD小鼠的肠道微生态紊乱;MIMP可通过一定剂量和时间依赖的方式调节炎性细胞因子的分泌,并可有效阻断MAPK及NF-κB信号通路的激活;MIMP可有效降低整体及具体水平的组蛋白乙酰化程度,提高HDAC的表达。本研究发现了MIMP改善肠道炎症的现象并阐明其相关机制,扩展了人们对于炎症治疗的认识,具有一定的理论创新。