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目的验证赤芍、白芍水提物对外周神经损伤引起的神经病理性疼痛的镇痛作用;研究赤芍、白芍水提物对神经病理性疼痛状态下脊髓胶质细胞活化的影响;继而研究赤芍、白芍主要化学成分芍药苷、芍药内酯苷对神经病理性疼痛的镇痛作用,并观察两个单体在不同给药时间点对脊髓胶质细胞的影响;探讨芍药苷、芍药内酯苷对神经病理性疼痛的作用机制,揭示赤芍、白芍“止痛”功效的物质基础。方法1.选用SD大鼠,通过坐骨神经慢性压迫（CCI）手术制备神经病理性疼痛模型,假手术只暴露神经不进行结扎。造模后大鼠分为假手术组（Sham）、模型组（CCI）、赤芍2g/kg组、白芍2g/kg组、加巴喷丁（GP）100mg/kg组。术后第2天各组动物灌胃给予相应的药物至术后15天。记录各组大鼠手术前1天,手术后3,7和15天的机械痛阈和热痛阈。2.观察灌胃给予赤芍、白芍水提物14天后CCI模型大鼠脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞的激活情况。造模15天后取各组大鼠L4-L5节段脊髓,制成石蜡切片,通过免疫组化方法观察CCI损伤同侧脊髓背角的小胶质细胞标志物Iba-1和星形胶质细胞激活标志物GFAP的表达。3.造模后大鼠分为假手术组（Sham）、模型组（CCI）、芍药苷80mg/kg组（PF+CCI）、芍药内酯苷80mg/kg组（AF+CCI）组。各组动物腹腔注射给予相应的药物至术后15天。记录各组大鼠手术前1天,手术后3,7,11和15天的机械痛阈和热痛阈。大鼠CCI术后分别于11,15天做完疼痛行为学检测后麻醉大鼠,取大鼠L4-L5节段脊髓,制成石蜡切片,通过免疫荧光方法观察脊髓切片神经损伤同侧的小胶质细胞、星形胶质细胞激活标志物Iba-1、GFAP的表达。4.造模后大鼠分为假手术组（Sham）、模型组（CCI）、芍药苷80mg/kg组（PF+CCI）、芍药内酯苷80mg/kg组（AF+CCI）组。各组动物腹腔注射给予相应的药物至术后15天,并于末次给药1小时后在做完疼痛行为学检测后麻醉大鼠,取大鼠损伤同侧的L4-L5节段脊髓进行相关指标检测。通过免疫荧光方法观察脊髓切片p-p38,p-JNK,CX3CR1蛋白的表达,并通过荧光双染法定位以上蛋白的表达位点;用ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α、CXCL1等细胞因子在脊髓L4-L5中的含量;用Western Blot检测p-p38,p-JNK,CX3CR1蛋白的表达。结果1.CCI可以诱导大鼠在手术后3天即出现持续的机械性触诱发痛和热痛觉过敏,表现为显著的机械和热痛阈的降低（p<0.001,p<0.001）;灌胃给予模型大鼠赤芍、白芍水提物以及加巴喷丁 14天能够有效抑制CCI诱导的机械痛阈和热痛阈的降低（p<0.05,p<0.05,p<0.01）,说明赤芍、白芍对外周神经损伤引起的神经病理性疼痛具有显著的镇痛作用。2.CCI术后15天模型大鼠脊髓背角小胶质细胞标志物Iba-1以及星形胶质细胞标志物GFAP的表达显著增加（p<0.05,p<0.05）。与CCI组比较,给予模型大鼠赤芍、白芍水提物可以显著降低Iba-1在脊髓背角的表达（p<0.01,p<0.05）;赤芍水提物组大鼠在给药14天后脊髓背角GFAP表达明显增高与模型组比较没有显著差异（p>0.05）,而白芍水提物组GFAP与模型组相比虽然有降低趋势但差异无统计学意义（p>0.05）。3.腹腔注射芍药苷、芍药内酯苷能够有效抑制CCI诱导的机械痛阈的降低;芍药苷能够有效抑制CCI诱导的热痛阈的降低,而同剂量下芍药内酯苷无明显作用;在给药11天和14天芍药苷和芍药内酯苷可以有效抑制脊髓小胶质细胞标志物Iba-1在脊髓背角的表达（p<0.05,p<0.05）,而腹腔注射芍药内酯苷14天可以显著抑制脊髓星形胶质细胞标志物GFAP的表达（p<0.05）,同剂量芍药苷作用不显著（p>0.05）。4.CCI术后15天模型大鼠脊髓IL-1β、TNF-α、CXCL1的含量显著升高（p<0.001,p<0.001,p<0.001）,CX3CR1、p-p38、p-JNK 的表达显著上调（p<0.01,p<0.001,p<0.05）;芍药苷和芍药内酯苷可以显著降低脊髓IL-1β、TNF-α的含量水平（PF:p<0.01,p<0.05;AF:p<0.05,p<0.05）,并显著下调 CX3CR1、p-p38 的表达（PF:p<0.01,p<0.01;AF:p<0.01,p<0.01）,芍药内酯苷可以显著下调p-JNK在脊髓的表达（p<0.05）,并降低趋化因子CXCL1的含量（p<0.01）,同剂量的芍药苷无上述作用;荧光双染结果显示CX3CL1、p-p38主要与Iba-1共表达,而p-JNK则主要与GFAP共表达。结论1.赤芍、白芍及其主要化学成分芍药苷和芍药内酯苷对外周神经损伤引起的神经病理性疼痛具有明显的镇痛作用。芍药苷可能主要通过抑制小胶质细胞产生镇痛作用,而芍药内酯苷可通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞产生镇痛作用。2.芍药苷和芍药内酯苷都可以抑制神经病理性疼痛状态下小胶质细胞的激活,其机制可能为下调小胶质细胞表面受体CX3CR1的表达,同时两个单体都可以抑制小胶质细胞内p38MAPK通路的激活,并降低脊髓促炎细胞因子TNF-α和IL-1 β的水平。3.芍药内酯苷对脊髓星形胶质细胞具有明显的抑制作用,同时还可以抑制胞内JNK信号通路的激活,并降低星形胶质细胞合成和释放的趋化因子CXCL1的含量,同剂量的芍药苷无上述作用。4.本研究揭示赤芍、白芍的主要化学成分芍药苷和白芍的主要化学成分芍药内酯苷可以通过调节脊髓炎性反应而对CCI诱导的神经病理性疼痛具有显著的镇痛作用,两个单体发挥镇痛的作用机制可能不完全相同。该发现揭示并丰富了传统医学赤芍、白芍“止痛”作用的科学内涵,初步探明了两药镇痛作用的物质基础,为赤芍、白芍的临床应用提供了科学依据,同时也为筛选神经病理性疼痛的潜在治疗药物提供实验与理论基础。