背景精子冷冻是现代人类辅助生殖中的重要技术之一。而精子库冷冻精子的复苏成活率是供精辅助生殖技术成功的关键。除此之外,临床上经常遇到男性取卵日因精神紧张造成取精困难的情况,有时甚至需要附睾穿刺取精,对这样的患者,如果能预先冻存精液,就可避免穿刺取精带来的损伤。因此,如何提高精子冷冻的效果是该领域研究的热点。精子冷冻会产生活性氧（Reactive oxygen species,ROS）,破坏精子细胞膜,产生胞内冰晶,造成精子运动能力降低、脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid,DNA）及线粒体功能受损等一系列的氧化应激损害。许多学者正在寻找不同的保护剂以尽量减少这种冷冻损害。目前左旋肉碱已经广泛地应用于生殖医学领域,它可以有效地促进精子的发生,提高精子的运动和受精能力,国外有研究学者将左旋肉碱添加至精子冷冻环境中,结果显示添加左旋肉碱可有效地提高精子的运动能力、降低DNA碎片率,降低精子细胞凋亡率和分裂率。国内尚未见类似研究,因此,本课题拟进一步探究左旋肉碱对人精子冷冻过程中的保护作用。目的探究不同浓度左旋肉碱对精子冷冻过程中前向运动（progressive,PR）、活力、DNA碎片指数（DNA fragmentation index,DFI）、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）、顶体反应（acrosome reaction,AR）等指标的影响,从而确定左旋肉碱是否能提高精子冻存的效果及最佳的添加浓度。资料与方法随机选择2017年6月至2017年11月于郑州大学第二附属医院生殖中心就诊的患者40例,征得病人知情同意后进行实验。所有患者均禁欲2-7d,手淫法留取精液,置于37℃水浴箱中液化。待液化后,按照第5版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》的要求进行精液处理及分析。纳入标准:液化时间≤1 h,精液量≥3 ml,精子浓度≥50×10⁶/ml,活力≥50%。使用常规1.8 ml塑料冷冻管作为载体,精子库常规使用的甘油-蛋黄-枸橼酸钠（glycerol-yolk-sodium citrate,GYC）作为基础冷冻保护剂,所有精液标本充分混匀后均分为5组:A组:对照组即冷冻前精液;B₀组:传统冷冻保护剂组;B₅组:冷冻保护剂中添加5 mmol/L左旋肉碱组;B₁₀组:冷冻保护剂中添加10mmol/L左旋肉碱组;B₂₀组:冷冻保护剂中添加20 mmol/L左旋肉碱组。精液与冷冻保护剂体积比为3:1,采用液氮蒸汽冷冻法对正常精液进行冷冻,精液冻存48h后复苏。采用计算机辅助精液分析系统检测冻存前后各组精子的PR、活力;应用流式细胞仪检测各组DNA碎片指数、线粒体膜电位以及顶体反应值。结果1.冷冻后精子前向运动百分比、活力、线粒体膜电位均低于冷冻前,精子DNA碎片指数高于冷冻前,差异均有统计学意义,P<0.05;2.四个冷冻组间前向运动精子百分比、活力间差异无统计学意义,P>0.05;3.精子DNA碎片指数依次为:冷冻保护剂中添加10 mmol/L左旋肉碱组<冷冻保护剂中添加20 mmol/L左旋肉碱组<冷冻保护剂中添加5 mmol/L左旋肉碱组<传统冷冻保护剂组(即B₁₀<B₂₀<B₅<B₀),其中B₁₀和B₂₀组明显低于B₀和B₅组,差异有统计学意义,P<0.05;4.精子线粒体膜电位依次为:传统冷冻保护剂组<冷冻保护剂中添加5mmol/L左旋肉碱组<冷冻保护剂中添加10 mmol/L左旋肉碱组<冷冻保护剂中添加20 mmol/L左旋肉碱组(即B₀<B₅<B₁₀<B₂₀),其中B₁₀和B₂₀组明显高于B₀和B₅组差异有统计学意义,P<0.05;5.四个冷冻组间顶体反应值差异无统计学意义,P>0.05。结论1.精液冻存会造成精子的损伤,降低精子前向运动百分比、活力和线粒体膜电位,增加精子DNA碎片指数;2.冷冻保护剂中添加10 mmol/L或20 mmol/L左旋肉碱会降低精子DNA碎片指数,减轻线粒体膜电位的下降,因此,可提高精子冷冻保存的效果,10mmol/L的左旋肉碱可以作为保护精子的有效成分应用到人精液冷冻中。