胶体金免疫层析试纸条用于旋毛虫病诊断及检疫的研究

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旋毛虫病(trichinellosis)是由旋毛虫(Trichinella spiralis)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。旋毛虫寄生的宿主范围广泛,可感染人及其他150多种动物。目前全世界大约有1100万人体感染者,1995-1997年国际旋毛虫病委员会报道1万多例病人,现已被列入再度肆虐的疾病(re-emerging disease)。本病不仅对人类的健康构成严重威胁,而且给养猪业和和肉类出口也造成重大的经济损失。国内外学者对旋毛虫病的免疫诊断方法进行了大量研究,已建立的旋毛虫病检测方法有间接荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等,但操作较复杂且需一定的仪器设备,在推广应用方面受到了一定的限制。因此,建立一种快速简便、特异敏感的旋毛虫病检测方法,不仅可用于人及动物旋毛虫病的血清学诊断及流行病学调查,也可用于肉类及肉制品中旋毛虫的检疫,是目前旋毛虫病防治工作中亟待解决的问题之一。 本研究以胶体金标葡萄球菌蛋白A(SPA)和旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原建立了免疫层析试纸条,用于检测样本中的旋毛虫抗体。由于SPA可与人及多种动物IgG的Fc段相结合,故该试纸条不仅可用于人旋毛虫病的血清学诊断,也可用于多种动物旋毛虫病的检测。 材料与方法 1.制备旋毛虫ES抗原:将旋毛虫肌幼虫在1640培养基中于5%CO2培养箱中培养18~20h,收集上清,透析和冷冻干燥后得到纯化ES抗原;测蛋白浓度后—80℃保存。 2.胶体金标记SPA:用枸橼酸三钠(Na3C6H5·7H2O)还原氯金酸(HAuCl4),制备颗粒直径为15nm的胶体金溶液,冷却至室温后,以0.2 mol/L的K2CO3溶液调节其pH值至6.0,4℃保存。测定胶体金的最适SPA标记量,制备胶体金标SPA,用玻璃纤维吸附标记物并冷冻干燥,密封保存于4℃。 3.胶体金免疫层析试纸条制备:用PBS将ES抗原和人IgG均稀释至2mg/mL,在
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