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目的:树突细胞是目前体内最强的抗原递呈细胞。本研究拟用冻存脐血来源的树突细胞经肿瘤细胞裂解物致敏后在人乳腺癌裸鼠移植模型体内诱导产生抗肿瘤免疫反应,为乳腺癌的树突细胞疫苗的临床应用提供依据。
方法:取健康脐血以淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离出单个核细胞以RPMI 1640加10%DMSO及40%FBS体系冻存备用。将冻存的脐血来源的单个核细胞复苏后,贴壁三小时后去除悬浮细胞,贴壁细胞加入GM-CSF100ng/ml,IL-450 ng/ml继续培养,每三天半量换液,于培养第六天加入TNF-a 100 ng/ml。培养第12天,DC分化成熟后,对其进行光镜、电镜等形态学鉴定,表型鉴定及功能检测,并以MCF-7肿瘤细胞裂解液致敏DC;以MCF-7细胞接种裸鼠,建立裸鼠原位移植瘤模型,将其分为四组并分别予以相应治疗:1.空白对照组:PBS iv,2.DC对照组:DC iv,3.CBMNC对照组:CBMNC iv,4.治疗组:DC+CBMNC。对实验结果的组间差异进行统计学分析。并验证DC的生物安全性及免疫排斥性。
结果:冻存脐血来源的单核细胞可被有效诱导为DC,其CDla阳性率为34.43%±0.33%,并可引发混合淋巴细胞反应,与新鲜脐血相比差异无统计学意义。以10<6> MCF-7细胞接种于裸鼠,形成的小鼠移植瘤模型可供转移或治疗研究使用。脐血来源的DC经MCF-7致敏后,对荷瘤小鼠进行治疗后可使肿瘤生长变得缓慢,与PBS组比较差异有统计学意义。
结论:冻存脐血可有效诱导DC;以MCF-7原位接种于裸鼠可建立稳定的人乳腺癌小鼠移植模型;以MCF-7致敏的DC对荷瘤小鼠有治疗作用,并具有生物安全性。