本研究系统探讨了水牛体细胞核移植的各种影响因素，并初步建立了水牛体细胞核移植的 一整套程序。 来自屠宰场水牛卵巢的卵母细胞经体外成熟培养 22～24小时后，在含有5μg／ml细胞松弛 素的操作液中进行去核，然后将经血清饥饿法（0 5％FBS）、0 1μg／ml Aphidic（APD）＋ 0 5％FBS培养 2～9大或一般培养法（10％FBS）培养的水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞直接 注射到去核的卵母细胞质中或注射到卵周隙中再经电融合形成重构胚。重构胚经5μM离于霉 素激活处理5min并在2mM的DMAP中培养3h后，在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中（30μl） 培养 8～10天，观察其卵裂和胚胎发育情况。成纤维细胞和颗粒细胞经 0 1μg／ml APD＋0 5％FBS 培养处理后的重组胚卵裂率均极显著的高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞 （p＜0 01），但囊胚发育率无显著差异（p＞0 05）。当电融合的电场强度为1500 V·μs／mm（电压 100v／mm×脉时15μs）时电脉冲3次，可获得72 04％的融合率和72 37％的分裂率以及10％的 囊胚率，其融合率显著高于2次电脉冲，卵裂率则显著高于4次电脉冲。耳皮成纤维细胞和颗 粒细胞经 0 1μg/ml APD＋0 5％FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均无显著差异 （63 06％vs 58 70％P＞0 05）。若以水牛颗粒细胞为核供体时，电融合法的重构胚分裂率显著 高于胞质内注入法（p＜0 05），囊胚发育率无显著差异。对水牛颗粒细胞第3、6代以及耳皮成 纤维细胞第6、10代进行核型检查时，各代具有正常二倍染色体的细胞比例没有显著差异 （p＞005），以这两种细胞不同培养代数作供体进行核移植时，各代数之间核移胚的体外分裂 率无显著差异（p＞0 05），但水牛颗粒细胞G₃代作供核时其核移胚的囊胚率显著低于G₄、G₅、 G₆代（p＜0 05）。 这些结果表明·（1）水牛耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对 比较稳定，(2APD预培养处理供体细胞能提高水牛体细胞核移植的效果，但血清饥饿培养则 无作用，（3）水牛颗粒细胞核移植的适宜电融合参数为100v／mm，15μs，3次电脉冲，（4）水牛耳 皮成纤维细胞和颗粒细胞均可作供核细胞，核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚，但前者的效 果略优于后者，且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；（5）电融合核移植胚胎发育率高 于胞质内直接注入法，但两者的总体效率相似。