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目的:1、观察不同浓度高糖培养对人视网膜色素上皮(h RPE)细胞的影响。2、观察核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)在高糖培养的h RPE细胞中的表达变化,以及在高糖诱导的h RPE细胞上皮间质转化(EMT)及炎症中的作用。方法:1、观察不同浓度高糖培养对h RPE细胞的影响。ARPE-19细胞分为(1)正常组:5.5m M葡萄糖培养48h(2)30m M高渗组:30.0m M高渗培养基培养48h(3)30m M高糖组:30.0m M葡萄糖培养48h(4)60m M高渗组:60.0m M高渗培养基培养48h(5)60m M高糖组:60.0m M葡萄糖培养48h。RT-PCR检测上皮标志物E-钙粘蛋白(E-cadhrein)、紧密连接蛋白(ZO-1)的表达水平以及间质标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;CCK8法检测各组细胞的增殖活力。2、SNHG1在高糖培养的h RPE细胞中的表达。60m M高糖分别刺激ARPE-19细胞0h、12h、24h、48h、72h,RT-PCR检测SNHG1的表达变化。3、SNHG1对高糖诱导的h RPE细胞EMT及炎症的影响ARPE-19细胞分为(1)正常对照组:5.5m M葡萄糖培养48h;(2)高渗对照组:渗透压60.0m M高渗培养基培养48h;(3)高糖干预组:60.0m M高糖培养48h;(4)si-NC组:将si-con SNHG1转染至细胞后,60.0m M高糖培养48h;(5)si SNHG1组:将si-SNHG1转染至细胞后,60.0m M高糖培养48h。RT-PCR检测各组细胞SNHG1的表达以及E-cadhrein、ZO-1、Vimentin、α-SMA的表达;CCK-8法检测各组细胞的增殖活力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移面积;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;ELASA法检测各组细胞IL-6、IL-1β的蛋白表达。结果:1、不同浓度葡萄糖培养对h RPE细胞EMT的影响RT-PCR结果示:30m M及60m M高糖组细胞中E-cadhrein、ZO-1的表达显著低于正常组,Vimentin、α-SMA的表达显著高于正常组(P<0.05)。60m M高糖组中E-cadhrein、Z0-1表达低于30m M高糖组,Vimentin、α-SMA的表达高于30m M高糖组(P<0.05)。CCK8实验结果示:30m M高糖组细胞增殖能力与正常组相比无显著差异(P>0.05),60m M高糖组细胞增殖能力显著高于正常组及30m M高糖组(P<0.05)。2、SNHG1在高糖培养的h RPE细胞中的表达SNHG1在60m M高糖培养条件下呈时间依赖性升高,48h达到最高。3、SNHG1对高糖诱导的h RPE细胞EMT及炎症的影响RT-PCR结果显示:高糖干预组细胞中E-cadhrein及ZO-1表达量均低于对照组,Vimentin及α-SMA表达量均高于对照组(P<0.05);Si-SNHG1组E-cadhrein及ZO-1均高于si-NC组,Vimentin及α-SMA均低于si-NC组(P<0.05)。细胞划痕实验显示:高糖干预组细胞48h迁移面积显著大于对照组(P<0.05),si-SNHG1组细胞48h迁移面积显著小于Si-NC组(P<0.05)。CCK-8实验结果显示:高糖干预组细胞较对照组增殖活力高(P<0.05),Si-SNHG1组细胞较Si-NC组增殖活力低(P<0.05)。流式细胞术结果显示:高糖干预组细胞凋亡率显著小于对照组(P<0.05),si-SNHG1组细胞凋亡率显著高于Si-NC组(P<0.05)。ELASA结果示:高糖干预组细胞中IL-6、IL-1β均高于对照组(P<0.05)。si-SNHG1组细胞中IL-6、IL-1β均低于si-NC组(P<0.05)。结论:1、高糖培养可诱导h RPE细胞发生上皮间质转化。2、SNHG1在高糖培养的h RPE细胞中呈时间依赖性表达升高,并参与h RPE细胞的上皮间质转化和炎症过程。3、SNHG1通过促进上皮间质转化促进h RPE细胞的增殖、迁移并抑制其凋亡。