乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤之一,已经成为中国女性发病率最高的肿瘤,对女性健康产生严重威胁,目前尚缺乏有效的治疗手段。细胞周期发生紊乱导致细胞增殖失控是肿瘤细胞恶性增殖的主要原因之一。在细胞周期调控过程中,CDK4在调控细胞进入增殖周期,促进G1/S期转换过程中发挥着至关重要的作用。研究发现,CDK4在乳腺癌等多种肿瘤细胞中存在着过表达和过度活化,是肿瘤治疗的重要靶点。胞内抗体能够靶向失活细胞内特异性抗原,来达到敲除细胞内重要靶蛋白表型的目的,因此本实验室前期利用胞内抗体技术,制备了具有较好抑瘤效应的抗CDK4胞内抗体,但是,该胞内抗体的具体的分子调控机制尚不清楚。蛋白质组学技术是以蛋白质组为研究的对象,从整体水平上研究细胞、组织或个体中蛋白质的组成、功能以及蛋白之间相互作用等的重要手段,在筛选肿瘤标志物、研究药物作用机制等方面发挥重要作用。因此,本研究利用蛋白质组学相关技术对抗CDK4胞内抗体在乳腺癌细胞中的作用机制进行了初步研究,主要研究结果如下:首先,分别制备稳定转染空载体的乳腺癌细胞MDA-MB-231/plpBg(Bg)以及三种稳定表达细胞核定位型抗CDK4胞内抗体的MDA-MB-231细胞MDA-MB-231/pBg-NLS-AK1(1N)、MDA-MB-231/pBg-NLS-AK2(2N)、MDA-MB-231/pBg-NLS-AK3(3N)的全细胞蛋白。其次,对提取的蛋白进行双向电泳,利用ImageMasterTM 2D Platinum 6.0软件分析差异点,结果发现共有83个差异蛋白点。选取其中重复性好、差异明显的29个蛋白点进行质谱鉴定,其中成功鉴定了 24个蛋白点。结果显示,鉴定出来的蛋白包括分子伴侣、细胞骨架蛋白、酶调节因子、核酸结合蛋白等多种类型,具有结合、催化活性、结构分子活性、翻译调节活性、转运活性等多种分子功能,并参与凋亡、代谢进程、刺激应答等多个生物学进程。差异蛋白的功能的多样性说明在乳腺癌细胞中细胞核定位型抗CDK4胞内抗体靶向的CDK4蛋白参与多种生物学功能调控。另外大部分鉴定出来的差异蛋白都与肿瘤的发生、发展密切相关。最后,我们也对鉴定出来的蛋白功能进行分析,发现了一些比较重要的蛋白质(如上调的 HINT、RhoGDI;下调的 CBX3、KHSRP、EIF3F、LGALS1),这些蛋白在细胞周期调控、蛋白质合成与转运、细胞凋亡以及肿瘤细胞生长、增殖、代谢、迁移等过程中发挥重要作用。综上,我们推测细胞核定位型抗CDK4胞内抗体通过靶向抑制CDK4蛋白活性后,可能通过上调HINT1等肿瘤抑制因子或下调CBX3等促癌因子的蛋白水平,从而发挥抗肿瘤效应,具体分子机制还需进一步深入研究。该项研究为抗CDK4胞内抗体进行肿瘤临床治疗奠定了基础。