【摘 要】
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鱼类是脊椎动物中兼具非特异性免疫和特异性免疫的生物,鲤鱼（Cyprinus carpio L.）作为低等脊椎动物,其特异性免疫系统尚不完善,非特异性免疫系统起着至关重要的作用。在鱼类的皮肤、鳃以及肠道组织表面覆盖着大量的黏液,这层黏液主要由上皮中的黏液细胞（Mucous cell）大量分泌的黏蛋白2（Mucoprotein,MUC2）与水及其他产物混合,形成胶冻状黏液平铺在黏膜组织上皮细胞表面所形
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鱼类是脊椎动物中兼具非特异性免疫和特异性免疫的生物,鲤鱼（Cyprinus carpio L.）作为低等脊椎动物,其特异性免疫系统尚不完善,非特异性免疫系统起着至关重要的作用。在鱼类的皮肤、鳃以及肠道组织表面覆盖着大量的黏液,这层黏液主要由上皮中的黏液细胞（Mucous cell）大量分泌的黏蛋白2（Mucoprotein,MUC2）与水及其他产物混合,形成胶冻状黏液平铺在黏膜组织上皮细胞表面所形成的。MUC2含量的变化可反映机体黏膜组织免疫力的高低,所以黏液细胞和MUC2的定量检测有助于鱼体相关疾病的诊治及前期预防。本实验取得主要结果如下:（1）本研究以鲤为研究对象,采用基因克隆技术克隆了MUC2基因序列,并对其结构特征及生物学信息学进行分析。本研究经克隆得到长度为2663bp的MUC2基因序列,相对分子质量为242256.95,主要结构域为VWD-C8-VWD-C8-TIL-VWC-CT保守结构域,该蛋白质主要结构为:α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲。其中该蛋白氨基酸中8.56%为α-螺旋;33%为β-折叠;无规则卷曲占蛋白总氨基酸的58.45%。该基因没有跨膜结构,为分泌型黏蛋白。（2）采用荧光定量PCR检测MUC2在健康鲤各个组织中的表达分布情况以及LPS、Poly I:C和维氏气单胞菌刺激后鲤组织器官中MUC2在m RNA水平的表达。结果表明健康鲤黏膜组织（皮肤、鳃、肠道）中表达量相对较高,其表达量顺序为:中肠>后肠>前肠>鳃>皮肤>心脏>肝脏>头肾>肌肉>体肾>血液>大脑>脾脏。刺激后检测黏膜组织器官中MUC2在m RNA水平响应发现:在皮肤中,LPS、Poly I:C和维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）感染3h其表达量开始增加,并于12h达到最大值（三种应激物刺激后分别增加5.56倍,11.26倍,12.51倍）于24h开始呈现下调趋势;在鳃中,其表达在感染6h时表达量达到峰值（增加4.07倍,9.59倍,14.41倍）,随后增加量逐渐减少至72h恢复正常值;在肠道中,刺激后不同肠段MUC2表达均呈现先增加后减少的变化趋势,且前肠于6h达到峰值（增加7.98倍,6.41倍,4.47倍）;中肠（增加10.17倍,11.63倍,10.52倍）和后肠（增加15.47倍,17.32倍,6.30倍）同样于6h表达量增加至最大值;值得注意的是,中肠在刺激后3h时表达量的增加几乎已经趋于峰值水平,其表达量已经分别是对照组的9.35倍,9.78倍和8.83倍,显然中肠MUC2在胁迫后表达响应最为敏感。（3）采用石蜡包埋,阿尔辛蓝-过碘酸雪夫试剂（AB-PAS）染色法制备组织切片,光学显微镜下观察皮肤、鳃和肠黏膜黏液细胞数量及形态分布情况。得到结论:健康鲤皮肤中单位面积黏液细胞数为6.87±1.61个,大多数是IV型,还有部分黏液细胞是II型;鳃组织单位面积黏液细胞数为9.33±1.21个,主要类型是IV、II型以及少量III型。肠道组织不同肠段中每单位长度肠绒毛两侧黏液细胞数量不同,前肠为9.53±1.48个,中肠为12.00±2.16个,后肠为10.33±2.08个,各个肠段黏液细胞类型均以II型和IV型为主。LPS、Poly I:C和维氏气单胞菌感染后黏液细胞分泌数量均呈现先增加后减少的变化趋势,并且在12h时皮肤（刺激物刺激后分别是11.0±1.58,9.00±1.87,9.60±2.96）,鳃（12.5±1.14,16.6±1.14,19.2±1.48）,前肠（14.20±1.64,18.00±1.58,17.2±1.64）以及后肠（17.60±4.27,15.00±2.74,25.60±5.22）中黏液细胞数量的增加量达到峰值,而中肠（15.80±0.83,18.00±2.12,16.40±2.30）中黏液细胞的数量在6h时增加量就已达到最大值。（4）利用石蜡包埋,苏木精-尹红（HE）染色法制备组织切片,在光学显微镜下观察皮肤、鳃和肠黏膜组织病理变化观察而病理变化分析发现主要从24h开始出现组织破损,48h以后其组织呈现急剧性破坏,大量细胞溶解坏死。利用免疫组化对黏液细胞所分泌的黏蛋白2（MUC2）的含量变化进行初步探究,本研究结果可为理解鲤黏膜抗感染的免疫功能提供理论依据,并对鱼类相关疾病的诊治提供参考。
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