醋酸棉酚对鲤免疫功能及毒物代谢酶基因表达的影响

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangtongfeng
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近年来,随着集约化养殖业的发展,对饲料的需求量越来越大,为缓解鱼粉、豆粕价格上涨带来的养殖成本压力,价格低廉、蛋白含量丰富的棉粕已成为水产饲料中的重要蛋白源之一。然而,棉粕中含有环丙烯脂肪酸、游离棉酚等抗营养因子,特别是游离棉酚过量蓄积会引起水产动物中毒,限制了其广泛应用。目前关于棉粕对水产动物的毒性研究主要集中于饲料中添加棉粕或者棉酚对水产动物生长、生殖、肝功能等方面影响,对水产动物免疫及体内代谢解毒方面的研究相对较少。本研究以我国主养经济鱼类鲤为研究对象,通过连续口灌给药的方式,探究不同剂量醋酸棉酚对鲤免疫功能以及解毒基因表达的影响,以期为棉粕的科学合理应用提供理论依据。主要研究结果如下:1.醋酸棉酚对鲤血清生理生化指标及肝脏抗氧化酶活性的影响按照0、10、40 mg/kg体质量剂量给鲤连续7天口灌醋酸棉酚,在口灌后的第1、3、7天取样,酶标法测定GPT、GOT、LZM、AKP、ACP、SOD、CAT、GSH-PX的活性和MDA、H2O2的含量;ELISA法测定细胞因子TNF-α、TGF-?、IL-6、IL-10、IL-1?的表达水平。结果显示,在口灌后的第1、3、7天,两醋酸棉酚剂量组血清GOT、GPT、AKP活性及血清、肝脏MDA、H2O2含量显著高于对照组(P<0.05),LZM、ACP活性及TNF-α、TGF-?、IL-6、IL-10、IL-1?的蛋白表达量显著低于对照组(P0.05),而CAT活性显著低于对照组(P<0.05);血清GSH-px活性在口灌后的第3、7天显著低于对照组(P<0.05);肝脏SOD、CAT活性在口灌后的第1、3、7天显著低于对照组(P0.05)。40 mg/kg醋酸棉酚组,鲤血清、肝脏SOD、GSH-px、CAT活性均显著低于对照组(P<0.05)。结果说明,10、40 mg/kg剂量的醋酸棉酚对鲤的免疫功能均有一定影响,而40 mg/kg剂量对鲤肝功能、免疫相关酶活性、细胞因子蛋白表达的影响更大。2.醋酸棉酚对鲤脾脏、头肾指数、免疫相关酶活性及基因表达的影响按照0、10、40 mg/kg体质量剂量给鲤连续7天口灌醋酸棉酚,在口灌后第1、3、7天取脾脏、头肾,计算免疫器官脾脏、头肾指数,测定脾脏、头肾免疫相关酶LZM、AKP、ACP的活性,以及免疫相关基因TLR1、TLR2、TLR3、My D88、TRAF6、NF-?b、TNF-α、TGF-?、IL-6、IL-8、IL-10、IL-1?的相对表达量。结果显示,在口灌后的第1、3、7天,两醋酸棉酚剂量组脾脏、头肾指数显著高于对照组(P<0.05),且高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),LZM、AKP、ACP酶活性变化异常。高剂量组脾脏和头肾的LZ-mc和LZ-mg的表达量显著高于对照组(P<0.05)。在口灌后的第1、3、7天,两剂量组脾脏TLR1、My D88、TRAF6、NF-?b表达量显著高于对照组(P<0.05),且呈明显的剂量效应;高剂量组脾脏TNF-α、TGF-?、IL-6、IL-8、IL-10、IL-1?的相对表达量均显著上调(P<0.05)。两个剂量组的头肾IL-8表达量及高剂量组头肾TGF-?、IL-1?、TLR1的表达量在口灌后的第1、3、7天显著高于对照组(P<0.05);低剂量组头肾TLR1、TLR2、TLR3、My D88、TRAF6在3天显著高于对照组(P<0.05);高剂量组头肾My D88和TRAF6的表达量在3、7天显著高于对照组(P0.05),AKP、ACP活性显著高于对照组(P0.05),TNF-α、TGF-?、IL-1?的蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),而IL-6的蛋白含量低于对照组。40 mg/kg棉酚组,鲤血清、脾脏、头肾LZM、AKP、ACP活性显著高于对照组和低剂量组(P<0.05);血清TNF-α、TGF-?、IL-6、IL-10的蛋白含量显著低于对照组(P<0.05),而IL-1?显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,醋酸棉酚增加了鲤对迟缓爱德华氏菌的易感性,降低了其对致病菌的抵抗力。4.醋酸棉酚对鲤CYP2K、CYP3A基因表达的影响给鲤连续7天口灌0、10、40 mg/kg体质量剂量的醋酸棉酚,在口灌后的第1、3、7天解剖取肝脏、肠道、中肾,检测CYP2K和CYP3A的m RNA表达量。结果显示,口灌10 mg/kg醋酸棉酚组,鲤前肠CYP2K的相对表达量在口灌后的第1、7天显著上调(P<0.05),中肠和后肠CYP2K的相对表达量在口灌后的第1天与对照组无显著差异,在第7天时显著上调(P<0.05),肝脏CYP2K的相对表达量在口灌后的第1、3天显著下调(P<0.05),中肾CYP2K的相对表达量在口灌后的第1、3、7天均显著下调(P<0.05);鲤肝脏、中肾、前肠CYP3A的相对表达量在口灌后的第1、3天下调,在口灌后的第7天显著上调(P<0.05),中肠CYP3A的相对表达量在第1、3、7天均显著下调(P<0.05);后肠CYP3A的相对表达量在第1、7天显著下调(P<0.05)。口灌40 mg/kg醋酸棉酚后,鲤前、中肠CYP2K的相对表达量在第1、3、7天均显著高于对照组(P<0.05),后肠CYP2K的相对表达量在第1、3天显著高于对照组(P<0.05),肝脏CYP2K的相对表达量在第1、3显著低于对照组(P<0.05),中肾CYP2K的相对表达量在第1、3、7天显著低于对照组(P<0.05);肝脏、中肾、前肠、中肠和后肠CYP3A的相对表达量在口灌后的第1、3、7均显著下调(P<0.05)。结果说明,醋酸棉酚可诱导鲤肠道CYP2K的表达,抑制肝脏、中肾CYP2K的表达,特别是高剂量的醋酸棉酚,会明显抑制鲤肝脏、中肾、肠道CYP3A的表达。推测,鲤肠道CYP2K可能在醋酸棉酚代谢中具有一定作用。
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