草质素体外抗氧化活性及对人肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hrz2009
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草质素(Herbacetin)是3,4’,5,7,8-五羟基取代的黄酮类物质,主要存在于笔筒草、红景天、棉花等植物中。目前,国内外鲜有对草质素生物活性及药理活性的研究报道。抗氧化剂被广泛应用于食品、医药行业,其中天然抗氧化剂因其毒副作用小而越来越受到关注。本文从DPPH自由基、羟自由基清除能力以及对Cu2+-H2O2/AAPH体系诱导蛋白氧化损伤及羰基化的抑制4个方面对草质素的体外抗氧化活性进行观察,为草质素在天然抗氧化剂领域的应用提供理论依据。结果表明:10-100μmol/L的草质素能够显著清除DPPH自由基和羟自由基,半抑制浓度(IC50值)分别为49.28、219.20μmol/L。同时,草质素呈浓度-依赖方式抑制Cu2+-H2O2及AAPH诱导的蛋白氧化损伤及羰基化。此外,本文还研究了草质素对人肝癌细胞HepG2凋亡的影响,以期探讨其分子作用机制,为肝癌治疗提供新思路。通过MTT法测定草质素对HepG2细胞活力的影响;采用免疫荧光染色(AO-EB/DAPI)、DNA及PARP断片化检测草质素对HepG2细胞凋亡的作用;对凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax、以及与线粒体途径相关蛋白Caspase-3、cytochrome-c的测定探讨草质素对HepG2细胞凋亡的分子机制。结果表明:草质素在25μmol/L浓度下作用48h后,对HepG2细胞活力无显著影响,50-200μmol/L范围内,呈浓度依赖方式抑制细胞活力;同浓度的草质素可诱导细胞发生DNA断片化、PARP断片化及细胞核固缩;与无药物血清组对比,25-100μmol/L的草质素能显著上调Bax,caspase-3、PGC-1α、胞浆中cytochrome-c等蛋白的表达、诱导HepG2细胞发生氧化应激及抑制Akt磷酸化。5mmol/L NAC(外源性抗氧化剂)前处理1h可显著的降低100mmol/L草质素诱导的细胞凋亡。
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