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目的利用酵母双杂交系统筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)相互作用的肝细胞蛋白,探讨TCTP在肝细胞癌发病机制中的作用,为肝脏疾病的研究及治疗提供新的思路和视角。方法采用Western-blot实验对TCTP在肝癌组织高表达和癌旁组织低表达的表达情况进行验证,从新鲜的肝癌组织提取mRNA,扩增TCTP基因,构建酵母双杂交诱饵质粒pDEST32-TCTP,对重组质粒酶切鉴定及序列测定,Western-blot检测TCTP在酵母中表达,在不同的缺陷培养基上培养酵母细胞,以验证系统的稳定性,在3AT浓度梯度培养皿中观察其生长的结果确定抑制自激活3AT的浓度,经BP、LR反应构建肝cDNA文库的猎物质粒;进行TCTP酵母双杂交文库筛选,对阳性克隆质粒测序和生物学分析;免疫共沉淀验证TCTP与细胞S期激酶相关蛋白-2(Skp2)和卵泡抑素(FS)两个候选蛋白在细胞内的相互作用,GST pull-down验证TCTP与Skp2和FS两个候选蛋白的相互作用;Western-blot实验对TCTP蛋白与Skp2蛋白相互作用促进下游p27蛋白的降解进行检测,通过软琼脂实验和MTT实验检测TCTP蛋白促进肝癌细胞的增殖。结果TCTP在肝癌组织高表达和癌旁组织低表达得到验证,成功构建酵母双杂交诱饵质粒pDEST32-TCTP,利用肝cDNA文库构建好猎物质粒,酵母双杂交系统稳定可靠,且不会产生自激活,适合文库筛选;酵母双杂交文库筛选出21个阳性克隆质粒,对阳性克隆测序和生物学分析,其中6个为已知蛋白基因:Smad4、HSP60、TAKl、Bcl-xl、FS、Skp2;TCTP蛋白分别与FS、Skp2蛋白相互作用在免疫共沉淀法和GST pull-down法中得到验证;TCTP与Skp2相互作用促进了Skp2蛋白介导的下游蛋白p27的降解,软琼脂实验和MTT实验显示TCTP蛋白可以促进肝癌细胞的增殖。结论肝细胞中存在TCTP蛋白与FS、Skp2蛋白相互作用,TCTP可能通过蛋白间直接相互作用调节Skp2,增强Skp2蛋白介导的下游蛋白p27的降解,引起细胞周期调控的异常,促进肝癌细胞的增殖,从而实现TCTP在肝细胞癌发病机制中的作用。