miR-1和miR-184对SH-SY5Y细胞系多巴胺转运体(DAT)表达的调节作用

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目的:检测niR-1、miR-184及多巴胺转运体(dopamine transporter, DAT)在多巴胺能细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨miR-1、miR-184在SH-SY5Y细胞系中对DAT基因表达的影响及其作用机制。方法:采用microRNA.org、miRBase、TargetScan.等在线数据库预测和文献参阅相结合的方法,选择可能作用于DAT基因的候选miRNAs,并化学合成候选miRNAs模拟物(miRNAs mimics和inhibitor)转染到SH-SY5Y细胞中。分别于转染后12h和24h后,提取NC-mimics组、NC-inhibitor组、miRNAs mimics组和miRNAsinhibitor组细胞总RNA和蛋白;采用实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞内的候选niRNA、DAT mRNA表达水平;采用Western Blot检测各组细胞内DAT蛋白表达水平。结果:(1)通过生物信息学预测结合参考文献挑选出的候选miRNAs为miR-1、miR-184;(2)miRNAs表达水平:miR-1mimics12h组和miR-1mimics24h组的miR-1表达量显著高于对照组(Ps<0.001),miR-1inhibitor12h组、niR-1inhibitor24h组与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05);miR-184mimics24h处理组中miR-184的表达量与对照组相比均有显著差异(P<0.01),miR-184inhibitor12h、miR-184mimics12hmiR-184inhibitor24h处理组与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05)。(3) DAT mRNA表达水平:miR-1mimics12h处理组中DATmRNA的表达量与对照组相比有显著差异(P<0.05), miR-1mimics24h组、niR-1inhibitor12h组和niR-1inhibitor24h组DAT mRNA的表达量与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05);miR-184mimics24h组DAT mRNA的表达量与对照组相比有显著差异(P<0.05),miR-184mimics12h组、miR-184inhibitor12h组和miR-184inhibitor24h组DAT mRNA的表达量与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05)。(4)DAT蛋白表达水平:niR-1mimics12h处理组中DAT蛋白的表达量与对照组相比有显著差异(P<0.05), miR-1mimics24h组、miR-1inhibitor12h组和miR-1inhibitor24h处理组中DAT蛋白的表达量与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05);miR-184mimics24h处理组中DAT蛋白的表达量与对照组相比有显著差异(P<0.05),miR-184mimics12h组、miR-184inhibitor12h组和miR-184inhibitor24h处理组中DAT蛋白的表达量与对照组相比均没有显著差异(Ps>0.05);结论:miR-1、miR-184参与SH-SY5Y细胞中DAT基因表达的调控,过表达的miR-1和miR-184均能抑制SH-SY5Y细胞中DAT蛋白的表达。
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