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目的:建立高载量肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的重症支原体肺炎(SMPP)模型,应用养阴清肺汤加味干预重症支原体肺炎小鼠,探讨养阴清肺汤加味对高载量MP诱导的SMPP BALB/c小鼠模型的NLRP3炎症小体及相关因子表达的影响,进一步阐明养阴清肺汤加味干预SMPP的作用靶点。材料与方法:用高载量MP菌液连续滴鼻,建立SMPP BALB/c小鼠模型并鉴定评价;模型成功建立后,行下一步实验。选取BALB/c小鼠96只,随机分正常组、模型组、阿奇霉素组、养阴清肺汤加味组,除正常组外均滴鼻高载量MP菌液,建立SMPP模型。在感染后第3天、第7天、第10天、第14天,各组随机处死6只小鼠进行取材,采用HE染色法观察小鼠的肺部病理,采用透射电镜观察第7天各组小鼠肺组织超微结构,运用Western blotting法检测肺组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)蛋白的表达,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织中活性氧簇(ROS)的水平并观察小鼠的一般状态,测量肺重量,计算各组小鼠肺指数。结果:1高载量组小鼠造模后,活动度减弱,饮食减少,体重减轻,分泌物增多,解剖后发现小鼠肺组织出现充血、实变、化脓等病理改变,HE染色结果发现,肺泡大部分破坏,有大量炎性细胞浸润,甚至肺泡完全实变,与正常组相比两模型组,在各个时间点小鼠肺指数和病理评分均高于正常组(P<0.05),在第3、7、10天,高载量组肺指数和病理评分均高于普通载量滴鼻组(P<0.05),提示模型建立成功,同时发现第14天后两模型组小鼠状态趋于平稳。2透射电镜扫描后发现,MP感染后的小鼠肺组织,出现了明显的肺泡上皮细胞破坏,细胞增生,Ⅱ型肺泡细胞游离面微绒毛增粗,脱落,染色质分布不均匀,板层小体排空,空泡化。阿奇霉素组微绒毛稍增粗,少量脱落,排列不整齐,部分线粒体肿胀,而养阴清肺汤加味组微绒毛少量脱落,排列尚整齐。3 HE染色后发现,模型组小鼠细支气管壁增厚,小鼠的肺泡结构破坏严重,肺泡间隔明显增宽,气管上皮脱落,大量炎性细胞渗出,肺组织毛细血管淤血;阿奇霉素组小鼠与模型组相比,炎细胞数量明显改善,仅见少量炎性细胞浸润;养阴清肺汤加味组小鼠肺泡内仅有少量炎性细胞,中度肺组织淤血。在感染后,肺指数和病理评分,与正常组相比,其余三组都升高(P<0.05),第7天趋于峰值。4 Western blot法检测NLRP3、ASC、caspase-1,ELISA法检测ROS、IL-1β结果显示,与正常组相比,MP感染后第3、7、10、14天,NLRP3、ASC、caspase-1、ROS、IL-1β表达均升高(P<0.05)于第7天达到峰值。在药物干预后,与正常组相比两给药组在NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β表达上,两给药组表达高于正常组;与模型组相比NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β表达均有所下调(P<0.05),其中NLRP3炎症小体各项指标表达,在药物干预后养阴清肺汤加味组表达低于阿奇霉素组(P<0.05)。结论:1.利用高载量MP菌液滴鼻方法,可以建立重症肺炎支原体肺炎小鼠模型。2.养阴清肺汤加味能有效的减轻SMPP小鼠的肺组织炎症。3.养阴清肺汤加味能够可以有效的下调MP感染小鼠肺组织中ROS、NLRP3、ASC、Caspase-1及血清中IL-1β水平的表达,可能为治疗SMPP的靶点。