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本研究探讨骨胶原肽、骨髓肽及其肽钙螯合物(高钙和低钙)对成骨细胞增殖和活性的影响,并将其作用方式与雌激素等进行比较,阐述其改善骨质的机理,为补钙制剂的研发奠定基础。主要研究结果如下:用0.25%的胰蛋白酶和0.1%的II型胶原酶顺序或同步水解24h内新生鼠的颅骨,制备原代成骨细胞(Osteoblast,OB),在DMEM/F12完全培养基中传代3次获得纯度高、稳定性好的OB,具有OB的典型形态和功能学特性,即碱性磷酸酶染色和茜素红矿化结节染色均成阳性。以CCK-8法绘制大鼠成骨细胞生长曲线,第2～5d为其对数生长期;在培养第2d加入不同浓度的受试物,第5d测定OD值,确定各受试物的最适作用浓度。测定多肽及肽钙螯合物在最适作用浓度下对OB生长曲线的影响,结果表明,102μg·mL-1 羊骨胶原肽(Collagen peptides,CP)和羊骨胶原肽钙螯合物(Calcium-chelated Collagen peptide,CCCP),l0μg·mL-1 的羊骨髓胶原版(Marrow peptides,MP)和羊骨髓胶原肽钙螯合物(Calcium-chelated Marrow peptide,CCMP)以及各种阳性对照即10μg·mL-1的大豆异黄酮、17β-雌二醇(17p-estradiol,E2)、8.3×10-1ng·mL-1 的降钙素(Calcitonin CT)与未添加组相比,在检测的1～7d内,OB数量均显著高于空白对照组(P<0.05)说明均可促进成骨细胞的增殖。碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)是成骨细胞活性的重要标志物,活性检测结果表明,各种阳性对照(E2、大豆异黄酮、CT)组的ALP活性极显著高于空白对照组(P<0.01)。所有肽钙螯合物(高钙和低钙的CCCP和CCMP)均可显著促进成骨细胞分泌ALP,且低钙螯合物组优于高钙螯合物组,前者与空白对照相比差异极显著(P<0.01),后者则差异显著(P<0.05)。而多肽(CP和MP)、BSA、未经水解的骨胶原蛋白以及CaCl2对成骨细胞的ALP活性没有影响(P>0.05)。骨钙素(Bone gla protein,BGP)是成骨细胞分化中期的标志物,是骨质钙化所需的必要因子。本研究结果表明所有阳性对照和4种肽钙螯合物均可显著提高成骨细胞的骨钙素水平(P<0.05),其中CCMP(高钙)与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。而CP、MP、CaCl2,未经水解的骨胶原蛋白以及BSA对BGP水平没有影响。综上所述,胶原肽、骨髓肽以及游离钙离子虽然可促进成骨细胞的增殖,但对成骨细胞的活性没有影响;与雌激素等阳性对照一样,胶原肽钙螯合物和骨髓肽钙螯合物既可促进成骨细胞的增殖,也可增强其活性。而BSA、未经水解的骨胶原蛋白对成骨细胞的增殖和活性均没有影响。所以肽钙螯合物在对成骨细胞增殖和活性影响方面具有雌激素样作用。