【摘 要】
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本研究应用RT-PCR方法,从马肝中扩增了两种马肝醇脱氢酶同工酶基因（hladh-e和hladh-s）,并先后将其克隆到大肠杆菌表达载体pET30a、pET20b（+）、pkk223-3、pTrc99a上,进行表达研究。对菌体内表达的两种马肝醇脱氢酶同工酶（HLADH-E、HLADH-S）的活性进行了研究。另外,由于本研究克隆的基因来源于马肝,所以尝试将两基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,在
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本研究应用RT-PCR方法,从马肝中扩增了两种马肝醇脱氢酶同工酶基因（hladh-e和hladh-s）,并先后将其克隆到大肠杆菌表达载体pET30a、pET20b（+）、pkk223-3、pTrc99a上,进行表达研究。对菌体内表达的两种马肝醇脱氢酶同工酶（HLADH-E、HLADH-S）的活性进行了研究。另外,由于本研究克隆的基因来源于马肝,所以尝试将两基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,在酵母中进行了马肝醇脱氢酶基因表达的初步探索。将扩增得到的hladh-e和hladh-s通过同源性比较发现,它与文献报道的hladh-e和hladh-s序列存在一个碱基的差异,但是氨基酸序列分析结果表明与文献报道的序列一致。将该基因先后克隆到各种表达载体上,构建成一系列重组质粒pLY105E/S、pLY106E/S、pLY107E/S、pLY108E/S、pLY109E/S、pLY11OE/S和pLY115E/S。对这些重组质粒进行表达研究,结果表明在E.coli BL21 （DE3） pLY109E/S中表达的重组蛋白HLADH-E/S可溶性效果最好。当菌体在LB培养基中于30℃振荡培养到OD600大约0.6时,用终浓度lmmol的IPTG诱导4h,可获得HLADH-E/S的高效表达。HLADH-E/S产量占菌体可溶蛋白的20%左右。对菌体的可溶性部分进行了处理,用镍柱纯化HLADH-E/S.对纯化后的HLADH-E/S活性进行研究,通过实验确定了最佳的反应温度、时间、底物浓度和辅酶浓度。该酶纯化后活力达到1.04×103U／mg,有望应用于工业化生产。
其他文献
目的:制备并标定第1批重组人绒促性素（recombinant human chorionic gonadotrophin, rHCG）国家标准品（生物测定用）。方法:以WHO第5批绒促性素国际标准品07/364效价为162 IU·瓶-1作为标准，采用2020年版《中华人民共和国药典》四部1209绒促性素生物测定法，联合5个实验室对第1批rHCG待标品进行生物活性协作标定。对待标品原液进行了等电点、
制造企业是我国经济建设中的重要的组成之一,不仅需要提高自身企业的经济效益,同时也要不断加强社会效益。但是由于制造企业组织结构、治理结构、管理制度等各方面缺少完善的制度,在企业财务内部控制中仍然存在较多的问题,阻碍了制造企业的稳定发展。正因如此,制造企业应当采取各种措施来提高自身的内部控制,从而使制造企业能够在发展的过程中不断提高质量与水平。本文针对风险管理视角下的制造企业财务内部管理进行深入性的分
“量感”就是对量的一种直觉感悟,是对物体的轻重、多少、大小、厚薄等属性的一种感受力。量感的培养有助于提高和完善学生的数学核心素养、问题解决能力以及估测能力。实践表明,基于“儿童视角”“单元视角”“发展视角”,在深入研读教材的基础上整体进行课堂架构和作业设计,可以有效实现深度学习,深入理解概念本质,有助于在量（li ngá）的活动中促进学生量感的培养。下面,结合北师大版教材三年级上册第五单元“
所谓量感，简单地说，就是对量的感受。具体而言，包括对物体大小、多少、轻重、厚薄、快慢等方面的感性认识。在日常教学中如何培养学生的量感？这是老师们十分关心的问题。现结合苏教版《数学》三年级上册“认识千克”一课，谈谈自己的一些做法和思考。认识千克是学生认识质量单位的开始，是进一步学习其他质量单位及单位换算的基础，也是培养量感的有效载体。如何针对学生特点，
内部控制是企业财务管理工作的重要手段,是保证会计资料真实性、完整性、合法性的有效途径之一,能降低公司的运营风险、财务风险,推动会计管理制度的严格实施。本文从制造业企业财务内部控制的作用出发,阐述了制造业企业财务内部控制存在的问题和应对措施,以期能规范企业作业,加快财务信息化建设,提高企业财务内部控制水平,促进企业可持续发展。
有这样一棵孱弱的桃树，生长于贾平凹的笔下，亦生长于我心中。一颗小小的桃核，仿佛一颗小小的心脏，承载着作者的梦，蓄积着作者的力。一棵刚冒出头的小芽，就是作者的希望。小桃树生长得并不顺利，爷爷无视它，蜂蝶冷落它，连猪也将嘴贪婪地伸向它欺负它……作者的成长也如此，走出秦岭深山，年轻气盛，
学生在生活中虽然听过或见过“千米”，但对“千米”的感知总体上还是模糊的，通常不会形成1千米的长度观念。另一方面，千米是一个较大的计量单位，它无法像米、分米、厘米和毫米那样制作教具或学具，也无法借助肢体动作进行比划。基于此，教师组织学生走一走或乘坐交通工具去直观感受1千米，引导他们利用间接经验，在推算与想象中建立1千米的表象，建构1千米的概念，同时为他们今后认识吨、公顷、平方千米这些较大的计量
“吨的认识”是人教版三年级上册第三单元的内容，是建立在克和千克的质量观念基础上进行教学的。吨是一个比千克大得多的质量单位，学生较难通过直接感知和体验获得经验从而建立相关表象。那么在教学过程中如何引导学生经历获得吨的体验过程，建立吨的质量观念，培养估量意识，进而发展量感呢？在研读了人教版、北师大版、西南师大版等教材、教师教学用书以及查阅相关资料后，我们把教学思路定位为：先从生活经验入手激活学生
教学内容：上海版《义务教育教科书·数学》三年级第一学期第49～50页。教学目标：1.联系实际认识长度单位千米（km），知道千米和米之间的进率并能换算。2.借助时间、步数体验1千米的长度，初步形成对千米的量感。3.通过多种活动感受数学与生活的密切联系，积累数学基本活动经验，体会数学学习的价值。
【课前思考】现实生活中有许多数学学习素材,小学数学课的内容应该更接近学生熟悉的现实生活,引导学生从现实生活中引出数学问题,通过触觉、视觉等感受物体的长度、大小、质量等,使抽象的数学获得直观、感性的整体意义。数学绘本《我家漂亮的尺子》是苏教版小学数学二年级上册《认识厘米和米》单元的同步阅读材料,