海参体腔液蛋白酶抑制剂及主要卵黄蛋白的功能特性研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaoqingshan
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海参由于具有较高的营养价值和经济价值,已成为我国沿海水产养殖的主要品种之一。体液是机体输送营养代谢废物的介质,其中含有蛋白酶抑制剂。海参体腔液是海参加工中的主要的副产物,约占海参总重的5-10%左右,随着海参产量的逐年递增,大量的海参体腔液被直接丢弃,造成资源的浪费和环境的污染。针对海参体腔液中的蛋白酶抑制剂,考察了海参体腔液对水产蛋白降解的作用,包括大菱鲆鱼鱼糜、南美白对虾及海参体壁肌肉层。利用SDS-PAGE电泳分析,确定了大菱鲆鱼鱼糜蛋白质降解的最佳条件为pH7.0、温度50℃、孵育时间4h。南美白对虾蛋白质降解条件:pH3.0、温度50℃、孵育时间2h。进一步利用SDS-PAGE电泳结合TCA可溶性寡肽含量的变化,考察了海参体腔液及其冻干粉对大菱鲆鱼鱼糜、南美白对虾、海参体壁肌肉层蛋白质降解的抑制作用。结果显示,体腔液及其冻干粉对海参肌肉层蛋白质降解的抑制效果最佳,同时,TCA可溶性寡肽含量变化的差异表明其对海参肌肉层蛋白质降解的抑制率最高可达87.17%,体腔液冻干粉可有效的保护海参肌球蛋白重链的降解。进一步研究海参体腔液对蛋白酶活力的影响,发现其对木瓜蛋白酶及胰蛋白酶均具有一定的抑制效果,并表现出较好的pH适应性、盐离子稳定性及热稳定性。应用SDS-PAGE电泳进行海参体腔液中蛋白酶抑制剂的特性研究,结果显示,体腔液对海参肌肉层蛋白的降解抑制能力并不受金属离子、热处理及酶解处理的影响,根据上述结果,推测出海参体腔液蛋白酶抑制剂可能是一种具有强热稳定性的非蛋白类物质或小分子多肽。针对从海参体腔液中的蛋白质,通过切胶回收并利用NanoLC-ESI-MS/MS鉴定发现,其为主要卵黄蛋白2。采用聚乙二醇沉淀法回收体腔液中的蛋白质,单因素适宜条件为:聚乙二醇6000终浓度10%、pH8.0、4℃静置6h。依据其蛋白质序列进行In silico模拟水解,进一步筛选抗氧化活性多肽,针对其中的四条多肽MY、FHH、LWG、WY,应用电子顺磁共振波谱法(ESR)及化学法检测羟基(·OH)自由基、ABTS自由基的清除活性,同时探究了四种活性多肽对HepG2细胞氧化应激的保护作用。结果显示,四种活性多肽均具有一定的抗氧化活性,其中LWG对·OH自由基清除效果较好(IC50=6.97±0.47 mM),WY可有效清除ABTS自由基(IC50=0.34±0.15 mM),并且对H2O2引起的HepG2细胞氧化应激具有保护作用。但其抗氧化能力与谷胱甘肽相比,还相对较弱。上述结果说明,海参体腔液中含有小分子的蛋白酶抑制剂,且含有丰富的主要卵黄蛋白,是抗氧化肽的良好来源,海参体腔液资源还有待于深入开发。
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