【摘 要】
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我国是畜牧养殖和动物源性产品消费大国,兽药违规滥用或非法使用情况严重,导致因药物残留超标引发的食品安全问题时有发生,不仅影响畜牧业的经济发展,而且会给消费者的健康带来潜在风险。为此,我国农业农村部发布的《食品中的兽药最大残留限量》（2019）标准中规定了常用兽药的残留限量及使用情况。有关部门监控兽药防止滥用的依赖于建立高效实用的检测技术,免疫检测技术具有分析快速、操作简单、灵敏度高及成本低廉等优点
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我国是畜牧养殖和动物源性产品消费大国,兽药违规滥用或非法使用情况严重,导致因药物残留超标引发的食品安全问题时有发生,不仅影响畜牧业的经济发展,而且会给消费者的健康带来潜在风险。为此,我国农业农村部发布的《食品中的兽药最大残留限量》（2019）标准中规定了常用兽药的残留限量及使用情况。有关部门监控兽药防止滥用的依赖于建立高效实用的检测技术,免疫检测技术具有分析快速、操作简单、灵敏度高及成本低廉等优点,特别是免疫层析试纸条在大批量样品的初筛中发挥着重要作用。本研究主要以抗寄生虫药物三氮脒（DIM）、双咪苯脲（IM）、常山酮（HA）、甲基盐霉素（NA）和氯舒隆（CLOR）,抗精神类药物阿扎哌隆（AZN）、噻拉嗪（XYL）和氯丙嗪（CPZ）为研究对象,通过设计并合成人工抗原,制备出针对目标分析物的高亲和力单克隆抗体,并以此为基础建立相应的免疫快速检测方法。（1）根据不同药物分子结构特征,对半抗原进行设计、修饰,并选择合适的偶联方式与载体蛋白合成具有免疫原性的人工抗原。采用紫外图谱对人工抗原表征,进行初步鉴定。（2）基于合成的人工抗原,经过动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞筛选、制备腹水等过程,获得针对DIM、IM、HA、NA、CLOR、AZN、XYL和CPZ的单克隆抗体,并对抗体进行性能鉴定,灵敏度IC50分别为0.37、0.074、0.49、1.70、6.46、0.35、0.15和0.84 ng/mL;亲和力常数分别为2.21×10~8、4.58×1010、2.41×10~8、1.31×10~8、4.73×10~7、1.28×10~8、6.94×10~7和1.21×10~8L/mol;亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2b、IgG2b、IgG1、IgG1、IgG1和IgG2b;特异性测定中,NA抗体对SAL的CR值为114.86%,AZN抗体对AZL的CR值为112.9%,除此之外,抗体均与其他化合物无交叉反应。（3）基于五种抗寄生虫药物单克隆抗体,开发了相对应的免疫快速检测方法。经过优化,建立的DIM和IM胶体金试纸条在牛奶中的消线值分别为50 ng/mL和5 ng/mL,IC50值分别为5.2 ng/mL和0.4 ng/mL,检测限为1.2 ng/mL和0.078 ng/mL;HA和CLOR胶体金试纸条在牛肝脏和肾脏中的消线值分别为20 ng/g、20 ng/g、100 ng/g和100 ng/g,IC50值分别为2.46 ng/g、2.56 ng/g、14.41 ng/g和11.45 ng/g,检测限为0.44 ng/g、0.46ng/g、2.98 ng/g和1.85 ng/g;NA的ELISA分析方法在鸡肝脏中对NA和SA IC50值分别为0.87 ng/g和0.85 ng/g,检测线分别为0.11 ng/g和0.10 ng/g。建立的免疫快速检测方法可应用于实际样品中的测定。（4）利用已制备的三种抗精神类药物,分别建立了AZN、XYL和CPZ的免疫快速检测方法。经优化,AZN胶体金试纸条在猪肉样品中,对AZN和AZL的消减线均为8 ng/g,IC50分别为0.74 ng/g和0.60 ng/g,检测限分别为0.14 ng/g和0.12 ng/g;XYL胶体金试纸条在牛奶中的消减线为5 ng/mL,IC50值为2.46 ng/mL,检测限为0.44 ng/mL;CPZ的ELISA法在猪肉中对CPZ和7-CPZ的IC50值分别为0.56 ng/g和0.55 ng/g,检测限均为0.05 ng/g。综上所述,本研究合成了八种兽药小分子人工抗原,建立了对应的兽药残留免疫快速检测方法,为实际样品中的兽药残留的快速筛查提供了一种有效的工具。
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