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非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一类全球范围内最常见的肝脏疾病,不断升高的NAFLD发病率与病死率给全球带来了巨大的医疗与经济负担。若不及时干预与治疗,NAFLD可由早期的非酒精性肝脂肪变（又称为单纯性脂肪肝）发展至较严重的非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）、肝硬化、甚至肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）、乃至死亡。但当前仍缺乏有效的药物治疗手段,深入了解NAFLD的发病机理对于开发、建立新的治疗策略至关重要。微小RNA（miRNA）是一类内源性非编码小RNA,其长度约为14-24个核苷酸。miRNA可以通过与靶基因m RNA分子的3’末端非翻译区（3’UTR）以碱基互补配对的方式结合并降解该靶基因m RNA或抑制该靶基因m RNA的翻译,通过调节靶基因的表达水平参与多种生理及病理过程。多项研究表明,多种miRNAs参与调控了脂肪肝和肝纤维化的发展过程,其中miR-125b是一种在NAFLD中异常高表达的miRNA,miR-125b与肝纤维化和HCC的发生密切相关。NAFLD的病理变化主要涉及到肝细胞脂肪变性、坏死与肝细胞凋亡,从而导致脂肪性肝炎、肝纤维化和肝硬化的发展,NF-κB信号通路是介导炎症反应的关键因子,可通过多种作用机制参与NAFLD的发病及疾病进展过程,研究发现,肿瘤坏死因子诱导蛋白3（tumor necrosis factor alpha-induced protein 3,TNFAIP3）是NAFLD病理过程中的关键负调控因子,而Target Scan预测显示TNFAIP3可能是miR-125b的下游靶点,miR-125b和TNFAIP3是否在NAFLD发生与疾病进展中的发挥作用仍然未知。第一部分非酒精性脂肪性肝病患者miR-125b与TNFAIP3水平相关性的研究目的:探索临床NAFLD患者体内miR-125b和TNFAIP3的表达水平及二者之间的相关性方法:收集的NAFLD组患者与健康对照组志愿者的外周血样本,采用ELISA检测了外周血中TNF-α,IL-6和IL-1β三种常见炎性细胞因子指标的水平,RT-PCR检测外周血样本中TNFAIP3、miR-125b的表达水平,Target Scan预测分析TNFAIP3、miR-125b关系。结果:NAFLD患者外周血中TNF-α,IL-6和IL-1β的分泌都显著上调,miR-125b的表达水平显著上升、而TNFAIP3的表达水平显著下降,miR-125b与TNFAIP3的3’UTR区域有结合位点。小结:NAFLD患者体内炎症反应加剧,miR-125b与NAFLD的发生发展正相关,而TNFAIP3与NAFLD的发生发展负相关。TNFAIP3可能是miR-125b的直接下游靶点。第二部分TNFAIP3通过调控NF-κB信号通路影响NAFLD细胞模型炎症反应目的:探索TNFAIP3在NAFLD发生发展过程中对炎症反应的调控作用方法:通过游离脂肪酸（FFA）处理Hep G2细胞构建了NAFLD细胞模型,用RT-PCR检测了TNFAIP3的表达水平,通过细胞转染技术敲低或过表达细胞模型中的TNFAIP3的水平,ELISA检测不同组中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,同时Western blots检测NF-κB信号通路关键分子的表达情况。通过NF-κB信号通路的激动剂（LPS）或抑制剂（Aconine）回复实验验证TNFAIP3是否通过NF-κB信号通路影响NAFLD细胞模型中的炎症分子的表达。结果:1.NAFLD细胞模型中TNF-α,IL-6和IL-1β的分泌都显著上调,TNFAIP3的表达显著下调。2.si-TNFAIP3可以显著促进NAFLD细胞模型炎症因子表达,而TNFAIP3过表达能够抑制这些炎症因子的表达。。3.敲低TNFAIP3可以明显增加NAFLD细胞模型ASK1、IκBɑ和p65的磷酸化水平,而TNFAIP3过表达可以降低ASK1、IκBɑ和p65的磷酸化水平。NF-κB信号通路的激动剂（LPS）能够逆转TNFAIP3过表达引起的抗炎症反应,而NF-κB信号通路抑制剂（Aconine）能够缓解TNFAIP3敲低后引起炎症反应。小结:TNFAIP3可通过负向调控NF-κB信号通路及其介导的炎症反应,或抑制ASK1的激活来抑制NAFLD的发生与疾病发展。第三部分miR-125b通过靶向TNFAIP3调控NF-κB信号通路介导的NAFLD细胞模型炎症反应目的:探索了miR-125b和TNFAIP3在NAFLD发生发展过程中对炎症反应的调控作用。方法:通过游离脂肪酸（FFA）处理Hep G2细胞构建了NAFLD细胞模型,通过双重萤光素酶报告基因检测确认miR-125b与TNFAIP3的相互作用,通过细胞转染技术将细胞模型下调或上调miR-125b的表达、敲低或过表达TNFAIP3的水平,并观察其带来的影响。通过免疫荧光检测了Hep G2细胞中TNFAIP3和p65蛋白的表达。结果:1.miR-125b在NAFLD体外细胞模型中的表达显著上调。2.miR-125b表达下调可显著降低TNF-α,IL-6和IL-1β的分泌水平,而miR-125b过表达则发挥了相反的作用。3.TNFAIP3是miR-125b的直接下游靶基因,miR-125b能够负向调控TNFAIP3的表达。4.miR-125b inhibitor可以降低ASK1、IκBɑ和p65的磷酸化水平,但敲低TNFAIP3可以逆转该作用;miR-125b mimic可以增强ASK1、IκBɑ和p65的磷酸化水平,但TNFAIP3过表达可以逆转该作用。小结:miR-125b可以通过靶向TNFAIP3来激活NF-κB信号传导途径并加剧NAFLD的炎症反应。第四部分miR-125b通过靶向TNFAIP3调控NF-κB信号通路介导的小鼠NAFLD模型炎症反应目的:在NAFLD小鼠模型体内验证miR-125b通过靶向TNFAIP3调控NF-κB信号通路介导的炎症反应方法:用高脂（HF）饮食饲养小鼠来构建NAFLD小鼠模型,通过慢病毒转染技术下调miR-125b、沉默TNFAIP3,检测小鼠血清中FFA及各种炎症因子的表达量。对肝脏组织进行HE染色以检测小鼠肝脏病理情况。结果:1.NAFLD小鼠模型血液中FFA水平增高,肝脏中miR-125b表达显著升高,而TNFAIP3的表达显著减低。2.敲低miR-125b的表达对FFA的水平没有显著影响,但进一步敲低TNFAIP3的表达可使FFA的水平显著上升。3.敲低miR-125b的表达使小鼠的体重、肝脏重量,肝细胞的脂肪变性、血糖及炎症因子表达显著降低,但是进一步敲低TNFAIP3能够减轻上述效应。小结:miR-125b可通过靶向TNFAIP3来影响NAFLD的炎症反应。结论:1.TNFAIP3是miRNA125b的直接下游靶基因,miRNA125b可负向调控TNFAIP3的表达。2.miR-125b可以通过直接靶向TNFAIP3来激活NF-κB信号传导途径并加剧NAFLD的炎症反应。