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目的:本实验目的是观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)脑内移植后在宿主体内存活、迁移和分化情况,及对癫痫持续状态(SE)后脑损伤的修复作用。
方法:1.原代培养NSCs,将重组腺病毒心肌营养素1(Adv-CT1)转染NSCs并采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)体外标记。2.建立氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型,将54只成功模型随机分为:①联合移植组18只(海马区注射CT1-NSCs-EGFP);②单纯移植组18只(海马区注射NSCs-EGFP);③模型对照组18只(海马区注射生理盐水);④正常对照组18只(腹腔注射生理盐水)。各组再分为移植后1w、2w、4w三个时间点,每个时间点6只大鼠。3.荧光示踪、免疫荧光、激光共聚焦扫描显微镜观察NSCs在宿主体内的存活、分化;水迷宫试验检测大鼠学习记忆功能;神经细胞凋亡检测(Nissls染色)观察海马神经元形态学变化;苔状纤维发芽检测(Timms染色)观察苔藓纤维发芽(MFS)的变化。
结论:1.匹罗卡品所致的SE能够引起大鼠海马神经元损伤和学习记忆功能障碍。2.CT1能够促进NSCs在SE大鼠脑内的存活、迁移和分化。3.NSCs-CT1联合移植能够抑制大鼠SE后MFS。4.NSCs-CT1联合移植能够改善大鼠SE后学习记忆功能障碍。