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目的:
1.建立2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导的变应性接触性皮炎(ACD)小鼠模型,观察小鼠的搔抓反应。
2.观察spantide(NK1受体拮抗剂)、L-精氨酸、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂预处理对ACD小鼠搔抓行为的影响,探讨P物质(SP)和一氧化氮(NO)在ACD小鼠模型瘙痒发生中的作用。
方法:
1.ACD小鼠模型的建立选用健康雄性BALB/c小鼠。模型组在第1、2天于腹部剃毛区外涂0.5%DNFB 25μL致敏,第6天于颈背部剃毛区外涂0.2%DNFB 20μL激发。对照I组外涂溶剂致敏和激发,对照Ⅱ组外涂0.5%DNFB致敏和溶剂激发,对照Ⅲ组外涂溶剂致敏和0.2%DNFB激发,致敏、激发剂量和用药时间均与模型组一致。
2.ACD小鼠搔抓行为的观察在无人、安静的环境中,于激发后0~1h、6~7h,12~13h,24~25h、36~37h、48~49h,60~61h,72~73h,84~85h,96~97h,用摄像机持续拍摄小鼠活动1h。录像回放,由不知情人员计算小鼠搔抓次数。
3.spantide、L-精氨酸、NOS抑制剂对ACD小鼠搔抓行为的影响(1)激发前0.5h和激发后11.5h、35.5h、59.5h、83.5h皮内注射生理盐水(0.05 mid、spantide(0.5nmol,0.05mL)、L-精氨酸(300nmol,0.05mid、L-NAME(NOS抑制剂;100nmol,0.05 mid、7-硝基吲唑(NOS1抑制剂;10nmol,0.05mL)或氨基胍(NOS2抑制剂;50nmol,0.05mid,分别观察小鼠搔抓次数的变化。
(2)激发前10min和激发后35h 50min、83h 50min皮内注射相同剂量的生理盐水、spantide、L-精氨酸、L-NAME、7-硝基吲唑或氨基胍,分别观察小鼠搔抓次数的变化。
4.皮损内总NO含量的检测在激发后0~1h、36~37h处死小鼠,剪下颈背部皮损进行组织匀浆,应用硝酸还原酶法检测匀浆上清液中NO含量。
结论:
1.ACD小鼠在激发后0~1h出现搔抓高峰,随后搔抓次数迅速减少,搔抓时程与迟发型变态反应过程相似。
2.spantide预处理对ACD小鼠搔抓行为无明显影响,提示SP可能不是DNFB诱导的BALB/c小鼠ACD模型的主要瘙痒介质。
3.L-精氨酸和NOS抑制剂预处理基本上不影响ACD小鼠搔抓行为,皮损内NO含量不随ACD小鼠搔抓时程的变化而变化,提示NO在DNFB诱导的BALB/c小鼠ACD模型伴发的瘙痒中可能不起主要作用。