London/Swedish APP双突变转基因小鼠模型的建立和初步表型分析阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种常见的中枢神经系统退行性变性疾病,其主要临床表现为进行性记忆减退和认知障碍。AD的主要神经病理学特征为过度的细胞外β淀粉样蛋白（amyloidβprotein,Ap）沉淀、细胞内神经纤维缠结增多、Tau蛋白的过度磷酸化、突触密度减少、神经元细胞减少等。为了更加深入的探究AD的发病机制,研究人员建立了一系列的动物模型作为研究工具。淀粉样蛋白前体蛋白（The amyloid precursor protein,APP）在AD发病机制中起重要作用,APP经过剪切加工后的Aβ是AD患者脑内老年斑的主要成分,而点突变的APP则是早发性AD（early onset of familialAlzheimer’s disease,FAD）的主要病因。目前国内外已经建立了多种APP突变型转基因小鼠模型如PDAPP转基因小鼠模型,APP23转基因小鼠模型等,但是大多数模型出现病理及行为学改变的时间比较滞后,通常在六月龄以后才出现上述改变。因此我们建立了London/Swedish APP双突变转基因小鼠,使小鼠能够比其它APP转基因动物更早的出现病症,提高使用模型进行研究时工作效率。本研究主要包括以下三个部分的实验内容:1.London/Swedish hAPP双突变转基因载体及小鼠的制备:将London/Swedish APP双突变基因插入到PDGF启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695^{V652i/K596N/M597L}转基因C57BL/6J小鼠。2.分子生物学水平及病理学分析:采用PCR技术鉴定APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠的基因表型,鉴定出四只Founder鼠。进一步用RT-PCR和Western blotting检测hAPP695^{V652I/K596N/M597L}基因的表达,筛选并建立了2高表达的系APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠。免疫组织化学显示在海马区双突变APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠出现的阳性细胞数目较单突变APP695^*（652I）转基因小鼠及野生小鼠明显增多。常规的病理学检查转基因小鼠脑组织未发现异常。3.行为学检测:采用水迷宫检测系统对APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠的行为学改变进行鉴定。结果显示,三月龄时APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠,单突变APP695^V652I转基因小鼠及野生小鼠在经过Morris水迷宫隐蔽平台实验时,APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠寻找到隐蔽平台的潜伏期比APP695^V652I转基因小鼠及野生小鼠明显延长。探索试验发现APP^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠比APP^V652I转基因小鼠及野生小鼠穿越目标象限的次数明显减少。综上所述,APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠较APP695^V652I转基因小鼠更早的表达hAPP,出现学习认知能力障碍的时间明显提前,说明我们成功建立APP695^{V652I/K596N/M597L}转基因小鼠阿尔茨海默病模型,为研究AD发病机制和药物研发提供了有价值的研究工具。