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目的：为阐明在HepG2肝癌细胞株中microRNA (miRNA)与p57kip2蛋白表达之间的调控关系,本文利用与p57kip2相关的miR-221、miR-222和miR-92b三种miRNA的抑制剂转染HepG2肝癌细胞,抑制三种miRNA的表达后,观察转染前后P57kip2蛋白和细胞活性的变化,从细胞和蛋白层面探讨p57kip2基因上游调控机制及其在肝癌发生中的作用。方法：体外培养人肝癌细胞HepG2和人肝细胞QSG-7701,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术首先检测miR-221、miR-222、miR-92b的表达。肝癌细胞随机分成空白对照组、阴性对照组和转染miRNAs抑制剂组。通过转染试剂lipo2000分别将miR-221、miR-222和miR-92b抑制剂转染入HepG2肝癌细胞株。转染48小时后,采用蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测P57kip2蛋白的表达,并用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)法检测细胞活性的变化。结果：1.qRT-PCR结果：miR-221、miR-222和miR-92b在HepG2肝癌细胞中均有所表达,但三种miRNAs的表达量均低于QSG-7701肝细胞。两种细胞中的miRNA表达量相比：miR-221:p=0.035<0.05; miR-222:p=0.021<0.05; miR-92b:p=0.016<0.05.差异均有统计学意义。2.在HepG2肝癌细胞中,荧光标记的siRNA转染5小时、24小时、48小时和72小时后,转染效率均在90%以上。3.MTT法结果：与空白对照组相比,阴性对照组细胞活性无明显影响,而转染miR-221抑制剂、miR-222抑制剂和miR-92b抑制剂的肝癌细胞组细胞活性均降低。阴性对照组与空白对照组相比(p=0.074>0.05),差异无统计学意义。miR-221抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.003<0.01),miR-222抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.002<0.01), miR-92b抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.001<0.01),差异均有统计学意义。4. Western blotting结果：与空白对照组相比,阴性对照组P57kip2蛋白的表达无明显影响。转染miR-221抑制剂、miR-222抑制剂和miR-92b抑制剂的肝癌细胞组P57kip2蛋白的表达均高于阴性对照组。阴性对照组与空白对照组相比(p=0.346>0.05),差异无统计学意义。miR-221抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.004<0.01), miR-222抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.006<0.01),miR-92b抑制剂组与阴性对照组相比(p=0.034<0.05),差异均有统计学意义。结论：1.miR-221、miR-222和miR-92b在肝癌细胞HepG2中均有所表达。2.在肝癌中p57kip2应是miR-221、miR-222和]miR-92b的靶基因,三种miRNA均负调控P57kip2蛋白的表达,促进细胞增殖。