防御素是一种富含碱性氨基酸的阳离子多肽,研究表明：17-p雌二醇可诱导绵羊输卵管上皮细胞绵羊β-防御素-1(SBD-1)的表达,但是这些研究都局限在体外二维培养模式中,其与机体内细胞三维生长状态可能差异较大,因此建立绵羊子宫内膜细胞体外三维培养模式为进一步研究防御素调控机理奠定基础。本研究主要是建立一种绵羊子宫内膜细胞体外三维培养体系,在此基础上应用实时荧光定量PCR技术检测体外添加不同浓度17-β雌二醇作用不同时间对绵羊子宫内膜细胞SBD-1 mRNA相对表达量的影响。结果表明：传统组织块培养法、胰蛋白酶消化法、胰蛋白酶消化+组织块培养法均可以获得二维培养模式下的绵羊子宫内膜上皮细胞与基质细胞。经比较分析,胰蛋白酶消化+组织块培养法获得的内膜上皮细胞与基质细胞较佳,可用于绵羊子宫内膜上皮与基质细胞的三维共培养。培养后的绵羊子宫内膜上皮细胞角蛋白18免疫细胞化学染色阳性,基质细胞波形蛋白染色阳性,二者生长曲线均呈S型。将获得的内膜上皮细胞与基质细胞分别接种在人工基底膜(Matrigel)、I型鼠尾胶原与Matrigel(1:1)混合成胶、I型鼠尾胶原三种不同的基质胶上,细胞均呈三维立体聚集生长,其中I型鼠尾胶原存在脱胶现象,Matrigel稳定但其价格昂贵,I型鼠尾胶原与Matrigel(1:1)混合成胶较稳定是建立绵羊子宫内膜上皮与基质细胞三维共培养模式的较佳选择。应用建立的三维培养绵羊子宫内膜细胞模型,qPCR检测结果发现：17-β雌二醇可诱导并上调SBD-1表达水平且最佳浓度为10-8mol/L,两者存在浓度和时间依赖性关系。