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毛细管电泳以其分离效率高,分析速度快,样品用量少,容易实现自动化等优点,已在医学、生物学等领域受到广泛关注,成为分离带电生物大分子最有效、最广泛的技术之一。核酸片段的质量电荷比值相近,对它们的分离一般使用毛细管筛分电泳。毛细管筛分电泳包括毛细管凝胶电泳和毛细管无胶筛分电泳,均以样品分子大小为分离基础。毛细管无胶筛分电泳是在自由溶液中加入低黏度不交联的线性聚合物溶液起到类似凝胶的筛分作用,以达到筛分目的。毛细管无胶筛分电泳具有以下优势:潜在的水溶性高分子很多,具有广阔的发展余地;筛分介质可以随时更换;每次电泳后可将筛分介质从毛细管内排出,重新装柱,增加了重现性,且样品成分不会滞留于柱内污染分离体系。尽管它的分辨率略低于毛细管凝胶电泳,但这种柱子寿命长,操作简单,重复性好。因此,它在生物大分子的分离,尤其是在核酸分离方面有着广阔的应用前景。由于分离介质的性能直接影响DNA分子的迁移特性、分离度、读出长度、重现性、注入时间、注入压力以及毛细管寿命等,因此分离介质的研究是DNA分离与排序工作中最重要的组成部分之一。聚环氧乙烷是一种亲水、电中性的线性高分子聚合物,本身具有自动涂敷能力,且比纤维素类聚合物寿命长,比线性聚丙烯酰胺稳定性好等优点。低浓度时,可抑制缓冲液中样品与毛细管壁的吸附,从而提高毛细管电泳的分离效率以及分析的重现性;高浓度时,可以作为分子筛,用于分离尺寸不同的分子或颗粒。本研究中,以聚环氧乙烷为筛分介质,用硅烷化处理的毛细管柱(31.2 cm×75μm,有效长度21.0 cm)分离DL5000 DNA Marker(DNA长度为100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000 bp),探讨了聚环氧乙烷浓度、缓冲溶液pH、分离电压和溴化乙锭浓度对分离双链DNA片段的影响,优化了分离100~5000 bp宽分子量范围DNA片段的条件。毛细管电泳的最佳条件为,聚环氧乙烷浓度0.5%、缓冲溶液pH值8.0、分离电压-12.0 kV、溴化乙锭浓度3.0μg/mL。在此条件下,对山梨醇脱氢酶基因和乙烯受体基因的聚合酶链式反应扩增产物同时检测、分离、鉴定效果良好。