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马病毒性动脉炎(Equine viral arteritis,EVA)是由马动脉炎病毒引起的一种通过呼吸道或生殖器官传播的传染病,是危害养马业的重大疾病之一,被世界动物卫生组织(OIE)列入检疫名录。近年来,我国社会经济不断发展和人们生活水平不断提高,养马和赛马越来越多,马术比赛国际化交流日益增多,该病的传播风险也越来越高。马病毒性动脉炎国际贸易指定诊断方法为病毒分离(仅精液)和中和试验,这两种诊断方法检测技术要求高、检测周期长,不利于对该病的快速应对和防控。为防止该病的传入,有必要建立和应用快速、高效、操作简便的诊断方法。本研究分别针对马病毒性动脉炎的抗体和病原建立了两种快速诊断方法,弥补了国际贸易指定方法的缺点,为该病的防控提供了技术支撑。1、间接ELISA抗体检测方法应用RT-PCR技术,以马动脉炎病毒基因组模板扩增出马动脉炎病毒N基因,将N基因插入到pET-32a原核表达获得约30kD的N蛋白,Western-blotting结果显示N蛋白具有良好抗原性,通过镍柱纯化获得N蛋白,在此基础上建立了马动脉炎病毒抗体间接ELISA诊断方法,制订了标准操作程序。应用建立的问接ELSIA诊断方法对2010年至2012年来自吉林、北京、天津、广东等6个不同地区疑似马病毒性动脉炎血清557份进行抗体检测,检出马动脉炎病毒抗体阳性血清11份,与病毒中和抗体检测结果完全相符。2、RT-LAMP病毒检测方法针对马动脉炎病毒的膜基质蛋白M基因保守序列,设计特异性引物,优化反应条件,建立了马动脉炎病毒的RT-LAMP诊断方法。2010年至2012年应用所建立的马动脉炎病毒RT-LAMP检测方法,在新疆、辽宁、黑龙江、内蒙古等4个省进行应用,2年时间检测精液、全血等样品1826份,共计检测出阳性9头份,对阳性马及时采取隔离和扑杀等措施,防止了马动脉炎病的传入境内。该方法已经制订成宁波局标准。研发的马动脉炎病毒的RT-LAMP诊断试剂盒专利正在申报中(已经受理,申请号：201210056298.9)通过对马动脉炎病毒的两种快速诊断方法的研究,为应对未来突发性检疫任务做好了技术储备。