【摘 要】
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[目的]鼻咽癌是一种起源于鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤,以地理分布差异大、起病隐匿、颈部淋巴结转移发生较早等特点区别于其他头颈部肿瘤。在过去十几年里,诊疗技术的不断进步大大提高了治疗效果,然而,治疗后仍有30%左右的患者发生复发和转移,导致5年生存率的提升较慢,预后较差。探索鼻咽癌转移相关的具体机制,发现新的诊治靶点将有助于降低鼻咽癌复发率和死亡率,改善患者预后。HSP27是由热和其他化学或物理应激源
【基金项目】
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国家自然科学基金(81302362);
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[目的]鼻咽癌是一种起源于鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤,以地理分布差异大、起病隐匿、颈部淋巴结转移发生较早等特点区别于其他头颈部肿瘤。在过去十几年里,诊疗技术的不断进步大大提高了治疗效果,然而,治疗后仍有30%左右的患者发生复发和转移,导致5年生存率的提升较慢,预后较差。探索鼻咽癌转移相关的具体机制,发现新的诊治靶点将有助于降低鼻咽癌复发率和死亡率,改善患者预后。HSP27是由热和其他化学或物理应激源诱导的热休克蛋白家族的亚型,在乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤中表达增加,在各种不同条件的刺激下,HSP27的多个丝氨酸残基被诱导发生磷酸化,其中Ser15,Ser78和Ser82是最常见的磷酸化位点,HSP27的磷酸化不仅导致其结构改变,其生物学功能也会有一定变化。近年来有研究发现,HSP27的磷酸化与肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移和化疗耐药有关,但在鼻咽癌细胞中的作用还尚未见报道。本研究拟探讨磷酸化HSP27对鼻咽癌增殖、侵袭转移能力的影响及相关分子机制。[方法](1)蛋白免疫印迹(Westernblot)技术检测人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株中HSP27和p-HSP27的表达水平;选用MK2抑制剂CMPD1处理CNE1和CNE2细胞间接抑制HSP27的磷酸化,用Transwell实验测定抑制HSP27磷酸化后鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的变化。(2)构建HSP27磷酸化突变体3D和HSP27去磷酸化突变体3A的重组质粒,通过慢病毒转染技术将重组质粒稳定的转染至CNE2细胞,合成过表达HSP27磷酸化和去磷酸化突变体的稳定鼻咽癌细胞株模型。(3)应用CCK8实验检测HSP27的磷酸化和去磷酸化状态对CNE2细胞增殖能力的影响。(4)Transwell侵袭和迁移实验检测HSP27的磷酸化和去磷酸化状态对CNE2细胞的转移能力的影响。(5)通过Western blot实验检测HSP27磷酸化突变和去磷酸化突变的CNE2细胞株中CyclinD1、E-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、Bax 和 Bcl-2 的表达水平。[结果](1)HSP27在CNE2中的表达水平高于CNE1细胞,而p-HSP27的表达水平恰好相反;使用CMPD1抑制HSP27的磷酸化,CNE1细胞的侵袭迁移能力显著降低,而CNE2细胞并没有明显变化。(2)CCK8实验结果显示,在96h内,HSP27磷酸化的CNE2-OE1细胞较空载体组CNE2-NC和HSP27去磷酸化的CNE2-OE2细胞的生长速度慢,HSP27的磷酸化可抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖。(3)Western blot结果显示HSP27磷酸化的CNE2-OE1细胞Bax的表达量增加,Bcl-2的表达量下调(4)Transwell迁移实验显示,HSP27磷酸化的CNE2-OE1细胞迁移能力增强,同时Western blot结果显示该细胞E-cadherin的表达下调,而对Vimentin的表达量在三个细胞中无明显变化。(5)Transwell侵袭实验显示,HSP27去磷酸化的CNE2-OE2细胞侵袭能力增强,同时Western blot结果显示该细胞MMP2和MMP9的表达水平增加。[结论](1)鼻咽癌CNE1和CNE2细胞的侵袭迁移能力与p-HSP27与HSP27的比值相关,而不是依赖于总的HSP27水平。(2)HSP27的磷酸化可抑制鼻咽癌CNE2细胞的生长,同时促进其凋亡。(3)HSP27的磷酸化可能通过下调E-cadherin而促使CNE2细胞发生EMT改变,促进CNE2细胞的迁移能力;而HSP27的去磷酸化通过上调MMPs的表达增强了鼻咽癌细胞的侵袭能力。
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