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目的:通过研究外泌体(exosomes)内细胞程序性死亡配体1(Programmed cell death ligand 1,PD-L1)在胃弥漫性大B细胞淋巴瘤(Gastric diffuse large B-cell lymphoma,GDLBCL)细胞培养上清液、正常胃黏膜细胞培养上清液、GDLBCL患者以及正常健康人血浆中的表达水平,探究exosomes内PD-L1在GDLBCL中的诊疗作用。进一步通过转染方法过表达及沉默GDLBCL的exosomes中PD-L1,来研究其对免疫微环境的作用。方法:收集GDLBCL患者和健康人的血浆,并培养正常胃黏膜细胞、GDLBCL细胞系,采用ExoQuick试剂法提取细胞培养上清液和血浆中外泌体,然后经过超速离心纯化,并使用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)拍摄提取的外泌体,蛋白印迹法(Western blot)实验及纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)检测提取的外泌体,再利用Western blot检测细胞培养上清液和血浆外泌体内PD-L1的表达差异,并分析临床病理参数与GDLBCL患者血浆外泌体内PD-L1表达水平的相关性。最后通过转染方法过表达及沉默GDLBCL细胞exosomes中的PD-L1,提取exosomes与人T淋巴细胞共培养来研究其对免疫微环境的作用。结果:1.Western blot:成功曝光CD9和CD63蛋白表明成功提取出外泌体。外泌体NTA检测显示:提取的外泌体直径大致呈正态分布,直径主要集中于70至120nm范围内。CD9和CD63的表达、电镜的成功拍摄、外泌体纳米颗粒跟踪分析结果均提示成功提取到了细胞培养上清液和血浆中的外泌体。2.Western blot实验结果显示:(1)外泌体内的PD-L1在GDLBCL细胞培养上清液中的表达水平高于正常胃黏膜细胞培养上清液中的表达水平;外泌体内的PD-L1在GDLBCL患者血浆中的表达水平高于正常人血浆中的表达水平。(2)组织学分型为ABC亚型患者血浆中外泌体内的PD-L1的表达水平高于GCB亚型患者血浆中的表达水平。(3)在III~IV期GDLBCL患者血浆中外泌体内的PD-L1的表达水平高于I~II期患者血浆中的表达水平。(4)IPI评分在3-5分的GDLBCL患者血浆中外泌体内的PD-L1的表达水平高于0-2分患者血浆中的表达水平。差异有统计学意义(均P<0.05)。3.PD-L1不同表达水平外泌体的构建:用PD-L1过表达质粒和PD-L1沉默质粒转染GDLBCL细胞48h后,GDLBCL细胞培养上清液外泌体内PD-L1表达水平发生了改变。与对照组相比,在用过表达质粒转染后的外泌体,其内PD-L1的表达显著上调;而在用沉默质粒转染后的外泌体,其内PD-L1的表达明显受到抑制。4.MTT显示:与对照组相比较,T淋巴细胞与PD-L1过表达组的外泌体共培养后,T淋巴细胞的增殖能力减弱;与PD-L1抑制组的外泌体共培养后,T淋巴细胞的增殖能力增强。结论:1.Exosoms内的PD-L1在胃弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系培养上清液及患者外周血中的过表达,外周血外泌体内PD-L1可能成为胃弥漫大B细胞淋巴瘤新的诊断指标。2.胃弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血外泌体内PD-L1的表达水平与患者临床分期、病理分型及IPI评分相关,外泌内PD-L1高表达可能提示预后不良。3.胃弥漫大B细胞淋巴瘤患者外泌体内PD-L1的过表达能抑制T淋巴细胞的增殖,抑制免疫微环境中的形成,Exosomes内PD-L1可作为临床抗PD-1治疗的免疫治疗的预测因子。