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产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic E.coli简称ETEC）是引起仔猪腹泻的主要病原之一。在家畜中，尤以初生幼畜特别易感，并引起生长发育迟缓，生产能力低下，甚至造成死亡，给畜牧业造成很大损失。仔猪腹泻的发生与大肠杆菌的肠毒素LT和ST有密切的关系。目前，对该病的防治主要采用大肠杆菌多价疫苗免疫和药物防治，但防治效果均不理想。卵黄抗体作为一类高效特异性生物制剂在防治仔猪腹泻中显示出明显的效果，为该病的防治开辟了新的途径。本研究扩增了不耐热肠毒素（LT）B亚基基因ltB及含有18个氨基酸的耐热肠毒素（ST1a）st1a的核苷酸序列，用linker连接后分别插入pET-28a-sumo、pET-32a、PHUE、pCold I、PGEX-6P-1等五种表达载体。构建带有HA标签的重组表达载体：将ltB基因与HA标签基因相连后插入pET-28a-sumo。经表达条件优化，获得重组蛋白LTB-ST1a和重组蛋白LTB-HA。将表达的LTB-ST1a蛋白作为免疫原对8只8月龄海兰褐蛋鸡进行免疫。共进行3次免疫，每次间隔2周。一免时，免疫剂量为0.4mg/ml，每只鸡注射1ml。二免时，免疫剂量为0.6mg/ml，每只鸡注射1ml。三免时，免疫剂量为0.8mg/ml，每只鸡注射1ml。二免后3d收蛋，用氯仿抽提法提取卵黄抗体，间接ELISA法检测抗体效价。以重组蛋白LTB-HA为包被抗原检测卵黄抗体中抗LTB的效价。用实验室构建菌株表达的4ST1a蛋白为包被抗原检测卵黄抗体中的ST1a的效价。结果显示，抗LTB的多抗的ELISA效价最高值为1:9192，抗ST1a的多抗的ELISA效价最高值为1:512。两种抗体的效价消长趋势相同，均在二免前后达到了最高峰，三免时降低，三免后效价逐步上升。用3只家兔进行的LT毒素中和实验（肠袢结扎实验）结果显示，卵黄抗体浓缩液与LT毒素1：1混合时，可以中和LT毒素的毒性作用，2倍稀释的卵黄抗体浓缩液不能完全中和毒素，4倍稀释的卵黄抗体浓缩液不能中和毒素。3组浓度卵黄抗体与毒素的混合物使肠段积液量呈递增趋势。ST毒素中和实验（乳鼠灌胃实验）结果显示，卵黄抗体能够中和ST1a毒素，避免了肠积液的产生，实验组小鼠健活，肠重比为0.075，阳性对照组小鼠全部死亡，肠重比为0.112。研究结果表明，用重组蛋白LTB-ST1a免疫产蛋鸡制备的卵黄抗体，具有对LT、ST1a毒素的中和作用，该研究为仔猪大肠杆菌性腹泻的防治提供了有效的特异性防治制剂，同时为肠毒素的深入研究提供了检测抗体。