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TEC是本研究室用代表性差异分析(representational difference analysis,RDA)技术分离肝再生相关新基因时,在大鼠肝大部切除后1hr再生肝中发现的一株新蛋白酪氨酸激酶基因,其同源体——小鼠TEC在1990年被发现,主要表达于肝组织和造血组织,在造血细胞增殖分化中起重要作用。我们克隆了大鼠TEC全长cDNA序列并在Genbank注册。随后的研究提示TEC可能在肝组织中也有重要功能。本研究旨在探讨TEC在肝再生过程中的意义及TEC与肝再生和肝细胞增殖信号调控的关系。 首先,为了明确TEC与肝再生和肝细胞增殖的关系,我们采用Northern杂交、Western印迹及RT-PCR检测TEC在大鼠各组织中分布。结果显示,肝大部切除后0.5 hr,TEC mRNA开始在再生肝表达增高,2 hr达高峰,4 hr后基本恢复正常;同时发现TEC主要分布在大鼠肝脏和肾脏组织;在增生活跃的15～17天龄胚胎肝组织以及鼠肿瘤细胞中,TEC呈高丰度表达。在建立了鼠肝大部分切除(2/3 partial hepatectomy,PH)模型后,用免疫沉淀(IP,Immunoprecipitation)和Western印迹法检测不同时间再生肝组织中TEC蛋白的表达及磷酸化活化水平。结果表明TEC蛋白在大、小鼠肝大部切除后1—2 hr发生快速磷酸化活化。TEC蛋白表达似有升高。RT-RCR结果显示在饥饿培养的原代大鼠肝细胞中,TEC能被HGF诱导表达;Northern杂交也显示,在肝癌细胞系HepG2中,TEC还能被胰岛素、血清诱导表达增加,但不能被EGF诱导表达。这些结果说明了TEC是一株与鼠肝再生有关的即刻早期基因,与肝细胞的增殖可能有密切关系。 随后,以大鼠肝干细胞WB F-344为研究对象,主要观察TEC是否参与HGF介导的肝干细胞增殖信号途径。首先,应用IP、Western blot、体外激酶实验(In vitro kinase assay)确定HGF刺激下TEC能否被酪氨酸磷酸化激活。结果与体内试验一样,TEC在HGF刺激后1hr内能被快速磷酸化激活;用荧光素酶报道基因系统检