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脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是饲料中常见的霉菌毒素,具有多种毒性作用。本试验通过断奶仔猪体内DON暴露及体外IPEC-J2(仔猪小肠上皮细胞)攻毒培养,从整体和细胞两方面探讨DON诱导仔猪小肠损伤及NF-κB炎性信号通路激活机制之间的关系。一方面,随机选取30头临床检查健康的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪,随机分成3组,每组10头,分别饲喂基础饲粮(对照组)、1 mg·κg-1 DON饲粮(低剂量组)、2 mg·kg-1 DON饲粮(高剂量组),试验期为60 d。另一方面,对IPEC-J2细胞进行体外培养,向培养液中添加不同浓度的DON(0、125、250、500、1000、2000 ng mL-1)24 h,并使用NF-κB通路抑制剂PDTC作为参照。试验结束时,收集断奶仔猪血清、IPEC-J2细胞及细胞培养上清液用于检测其中炎性介质及肠道通透性指标活性;每组选择5头仔猪剖杀,取十二指肠、空肠中段及回肠组织以及IPEC-J2细胞观察其中超微结构及形态变化;检测小肠黏膜中ZO-1蛋白表达与分布情况;检测IPEC-J2细胞的存活率;检测小肠组织及IPEC-J2细胞中的炎性介质和NF-κB通路相关基因及蛋白的相对表达量;检测NF-κB p65蛋白在IPEC-J2细胞中的分布及入核与表达情况。试验结果如下:1.试验组断奶仔猪小肠上皮细胞超微结构被破坏,DON可使小肠黏膜部分形态发生改变,甚至导致组织受损;血清中DAO及D-LA的活性随饲料中DON剂量的增加而显著升高(P<0.05或P<0.01);试验组中断奶仔猪小肠黏膜中ZO-1蛋白的分布及平均光密度值与对照组相比不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。2.DON使血清中IL-6、NO及TNF-α的活性发生异常调节(P<0.05或P<0.01),小肠组织中IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA相对表达升高(P<0.05或P<0.01);随着DON浓度的增加,小肠组织中的NF-κBp65、IKKα/β、iNOS和COX-2的mRNA的基因相对表达呈现上升趋势(P<0.05或P<0.01),IκB-α则呈现下降趋势(P<0.05或P<0.01),NF-KB p65、p-NF-κB p65、COX-2蛋白相对表达量以及IκB-α磷酸化与未磷酸化的比值均随饲粮中DON含量的增加而上升(P<0.05或P<0.01)。3.DON使IPEC-J2细胞密度降低,细胞器扩张变形、核膜皱缩、核内染色质聚集;细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);随着攻毒DON剂量的增加,培养上清液中DAO含量也随之显著上升(P<0.01),添加PDTC后DAO含量有降低趋势(P<0.01)。4.随着DON浓度的增加,细胞中IL-6、TNF-α、NO的活性及IL-1β与IL-6的mRNA相对表达量均随之呈现上升趋势(P<0.01),而培养液中添加PDTC后,部分检测因子的上升趋势有所降低(P<0.05或P<0.01);细胞内NF-κB p65、IKKα及IKKβ的mRNA相对表达量随DON浓度的增加均不同程度上调(P<0.01),而IκB-α则呈现下降趋势(P<0.01),同时添加PDTC后不同程度抑制变化趋势;随着DON剂量的增加,NF-κB p65在细胞内的表达增加;DON浓度达250 ng·ml-1及以上时NF-κB p65入核表达量较对照组均极显著增加(P<0.01),添加通路抑制剂后,该表达量有所降低(P<0.01)。综上所述,DON暴露可致断奶仔猪小肠上皮细胞受损,破坏肠屏障,使肠道通透性增加,诱发小肠组织炎症,对NF-κB信号通路产生一定影响。同时,DON可以使IPEC-J2细胞形态发生改变,破坏其超微结构,增强细胞膜的通透性,上调细胞内部分炎性因子的基因转录并改变细胞内NF-κB相关基因蛋白的表达,激活该炎性通路,导致细胞内炎症反应的加剧。