【摘 要】
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目的:探讨重组腺病毒载体介导的STAT1蛋白质表达及RNAi干扰STAT3基因表达对人U87-MG脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型的生长抑制作用,探索其可能机制,为胶质瘤的基因治疗提供新的实验依据。方法:(1)构建重组腺病毒,利用Ad空载体腺病毒(Recombinant adenovirus-negative control,NCAd-stat1、NCAd-stat3-si RNA)构建Ad-stat1
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目的:探讨重组腺病毒载体介导的STAT1蛋白质表达及RNAi干扰STAT3基因表达对人U87-MG脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型的生长抑制作用,探索其可能机制,为胶质瘤的基因治疗提供新的实验依据。方法:(1)构建重组腺病毒,利用Ad空载体腺病毒(Recombinant adenovirus-negative control,NCAd-stat1、NCAd-stat3-si RNA)构建Ad-stat1单基因重组腺病毒(Recombinant adenovirus-mediated stat1,Ad-stat1)、Ad-stat3-si RNA单基因重组腺病毒(Recombinant adenovirus-mediated stat3-si RNA,Ad-stat3-si RNA)和Ad-stat1/stat3-si RNA双基因重组腺病毒(Recombinant adenovirus-mediated stat1andstat3-si RNA,Ad-stat1/stat3-si RNA)并鉴定。(2)将36只U87皮下移植瘤裸鼠随机分为Ad-stat1单基因治疗组、stat1阴性对照组(NCAd-stat1)、Ad-stat3-si RNA单基因治疗组、stat3阴性对照组(NCAd-stat3-si RNA)、Ad-stat1/stat3-si RNA双基因治疗组及PBS对照组(PBS组),6组均进行瘤体内注射给药。观察其治疗U87裸鼠皮下移植瘤的效果。(3)苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肿瘤组织及主要脏器形态学改变,监测安全性。(4)Real Time PCR、免疫组化及Western blot方法检测肿瘤组织STAT1和STAT3m RNA及蛋白表达水平。(5)用Annexin-APC/PI双染和TUNEL的法检测肿瘤细胞凋亡。结果:重组腺病毒载体介导的STAT1蛋白质(Ad-stat1)、STAT3-si RNA(Ad-Stat3-si RNA)及共表达组(Ad-stat1/stat3-si RNA)均可显著抑制U87裸鼠皮下移植瘤生长,共表达组治疗效果优于单基因治疗组。重组腺病毒治疗组的心、肝、脾、肺、肾及脑组织与PBS相比无明显组织形态差异。Western blotting、RT-PCR方法结果显示,共表达质粒治疗后,STAT1 m RNA和蛋白水平表达显著增强,STAT3m RNA和蛋白水平显著下降。Annexin V和TUNEL的实验表明,共表达质粒联合治疗能够显著促进肿瘤细胞凋亡坏死。结论:(1)Ad-stat1,Ad-stat3-si RNA和Ad-stat1/stat3-si RNA均可以显著抑制U87裸鼠皮下移植瘤生长。(2)重组腺病毒治疗对动物心、肝、脾、肺、肾无明显毒性。(3)Ad-stat1/stat3-si RNA双基因治疗组抑瘤效果优于单基因治疗组,说明Ad-stat1/stat3-si RNA有抑癌增效的相加作用。(4)Ad-stat1/stat3-si RNA的抑瘤机制可能和激活细胞凋亡及坏死有关。
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