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目的:通过观察补肾安胎冲剂对复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)小鼠胎盘微血管内皮细胞(Placenta microvascular endothelial cells,PMVEC)、胎盘血管平滑肌细胞(Placenta vascular smooth muscle cell,PVSMC)、胎盘成纤维细胞(Placenta fibroblasts,PF)中磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine,AKT)蛋白表达的影响,探讨补肾安胎冲剂防治RSA的作用部位和靶点,为中医药治疗RSA提供科学依据。方法:实验以CBA/J雌鼠与健康Balb/c雄鼠合笼建立正常妊娠小鼠模型,正常妊娠小鼠为正常组。以CBA/J雌鼠和DBA/2雄鼠合笼建立RSA小鼠模型,将其随机分为模型组、补肾安胎冲剂高剂量组(BSAT-H)、补肾安胎冲剂中剂量组(BSAT-M)、补肾安胎冲剂低剂量组(BSAT-L)和黄体酮组。每组各10只。与妊娠第1天,正常组与模型组采取蒸馏水灌胃,补肾安胎冲剂低、中、高剂量组分别按3.9g/(kg·d)、11.7g/(kg·d)、35.1g/(kg·d)的剂量灌胃,黄体酮组以26mg/(kg·d)的剂量灌胃。连续干预15天后处死孕鼠,肉眼观察各组孕鼠胚胎的丢失及胎盘的发育情况。无菌状态下取出胎盘组织,在体式显微镜下分离出各组孕鼠PMVEC、PVSMC、PF,利用细胞免疫荧光法检测PI3K、AKT在各组孕鼠PMVEC、PVSMC、PF中的分布及阳性表达情况,采用Western blot法检测PI3K、AKT在各组孕鼠PMVEC、PVSMC、PF中的蛋白表达。结果:1、胚胎丢失率:与正常组相比,模型组孕鼠胚胎丢失率显著升高(P<0.01)。与RSA模型组相比,所有治疗组的孕鼠胚胎丢失率均明显下降(P<0.01);与BSAT-H相比,BSAT-M和BSAT-L的孕鼠胚胎丢失率均升高(P<0.01);与黄体酮组相比,BSAT-H孕鼠胚胎丢失率差异不明显(P>0.05)。结果说明,补肾安胎冲剂治疗组能降低RSA孕鼠胚胎丢失率,其中BSAT-H效果最为显著。说明补肾安胎冲剂治疗方法确实可以降低RSA孕鼠胚胎丢失率,从而改善妊娠结局。2、细胞免疫荧光法检测PI3K、AKT在各组孕鼠PMVEC中的分布及阳性表达:通过荧光显微镜检测各组孕鼠PMVEC的分布情况,结果发现PMVEC的细胞核在紫外的激发下为蓝色,免疫荧光显示PMVEC的阳性表达呈现红色荧光。正常组孕鼠PI3K、AKT蛋白在PMVEC的阳性表达明显高于模型组(P<0.01);与模型组相比,所有治疗组PI3K蛋白表达和BSAT-H、BSAT-M及黄体酮组AKT的蛋白表达均上升(P<0.01);与BSAT-H比较,BSAT-M和BSAT-L中PI3K、AKT蛋白表达均降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与黄体酮组相比,BSAT-H的AKT蛋白表达差异不显著(P>0.05)。3、细胞免疫荧光法检测PI3K、AKT在各组孕鼠PVSMC中的分布及阳性表达:通过荧光显微镜检测各组孕鼠PVSMC的分布情况,结果发现PVSMC的细胞核为蓝色,免疫荧光显示PVSMC的阳性表达呈现红色荧光。与正常组相比,模型组孕鼠PI3K、AKT蛋白在PVSMC中的含量显著下降(P<0.01);与模型组相比,所有治疗组中PI3K蛋白表达均显著升高(P<0.01),治疗组中BSAT-H、BSAT-M和黄体酮组AKT蛋白表达量显著升高(P<0.01),但BSAT-L中AKT蛋白未见上升(P>0.05);与BSAT-H相比,BSAT-M和BSAT-L中PI3K、AKT蛋白表达含量显著下降(P<0.01);黄体酮组AKT蛋白表达含量与BSAT-H比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4、细胞免疫荧光法检测PI3K、AKT在各组孕鼠PF中的分布及阳性表达:结果表明,采用荧光显微镜观察PF的细胞核为蓝色,免疫荧光显示PF的阳性表达呈现红色荧光。与正常组相比,模型组孕鼠PF中PI3K、AKT蛋白表达含量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,所有治疗组PI3K的蛋白表达明显上升(P<0.01),BSAT-H、BSAT-M和黄体酮组中AKT蛋白表达含量明显升高(P<0.01)。与BSAT-H相比,BSAT-M和BSAT-L中PI3K、AKT蛋白表达含量显著下降(P<0.01);黄体酮组AKT蛋白表达含量与BSAT-H相比,差异无统计学意义(P>0.05)。5、Western blot法检测各组孕鼠PMVEC中PI3K、AKT的蛋白表达:与正常组相比,模型组孕鼠PMVEC中PI3K、AKT蛋白表达量显著下降(P<0.01);与模型组对比,补肾安胎冲剂治疗组及黄体酮组孕鼠PMVEC中PI3K、AKT蛋白表达量均有不同程度的升高(P<0.01);BSAT-M和BSAT-L孕鼠PMVEC中PI3K、AKT蛋白表达量较BSAT-H相比均下降(P<0.05)。6、Western blot法检测各组孕鼠PVSMC中PI3K、AKT蛋白的表达情况:与正常组相比,模型组小鼠PVSMC中PI3K、AKT蛋白表达量明显下降(P<0.01);与模型组对比,所有治疗组孕鼠PVSMC中PI3K、AKT蛋白表达量均升高(P<0.01);BSAT-M和BSAT-L孕鼠PVSMC中PI3K、AKT蛋白表达量较BSAT-H相比均下降(P<0.01);与BSAT-H相比,黄体酮组AKT蛋白表达含量下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。7、Western blot法检测各组孕鼠PF中PI3K、AKT蛋白的表达:与正常组相比,模型组孕鼠PF中PI3K、AKT蛋白表达量明显减少(P<0.01);与模型组对比,所有治疗组孕鼠PF中PI3K、AKT蛋白表达量均升高(P<0.01);BSAT-M和BSAT-L孕鼠PF中PI3K、AKT蛋白表达量与BSAT-H相比均下降(P<0.01)。结论:补肾安胎冲剂降低RSA孕鼠胚胎丢失率,促进RSA孕鼠母胎界面血管的生成,其机制可能是补肾安胎冲剂通过促进PMVEC、PVSMC、PF中PI3K、AKT蛋白的表达,从而促进RSA孕鼠母胎界面血管的生成,改善妊娠结局。