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目的:探索同时从C57BL/6小鼠骨髓分离培养间充质干细胞(MSCs)与内皮前体细胞(EPCs)并对其鉴定的方法,并探讨EPCs条件培养基及EPCs在非接触共培养体系里对MSCs增殖的影响。方法:1.小鼠骨髓细胞经改良差时贴壁法分离,以48 h为时间点,48 h内贴壁细胞传至3代后行成骨、成软骨、成脂分化诱导实验,流式细胞术(FCM)检测其表面标记;48 h后收集未贴壁细胞,传至3代后行血管形成实验,传至5代后行CD31免疫荧光细胞染色实验,FCM检测其表面标记。2.将MSCs分为0 EPC-CM组(采用LG-DMEM培养)、50%EPC-CM组(采用50%EPC-CM+50%LG-DMEM培养)和100%EPC-CM组(采用100%EPC-CM培养)。3.取第3代MSCs和EPCs,按1:1的细胞比例接种入Transwell共培养系统中,以下室接种MSCs,上室接种EPCs为实验组。同时设置相同密度单纯MSCs接种于下室为对照组。采用MTT比色法和Ed U荧光标记法检测MSCs对EPCs增殖能力的影响。结果:1.FCM检测第3代MSCs高表达Sca-1、CD29,低表达CD45、CD11b;经诱导可向成骨、成软骨、成脂方向分化。FCM检测第3代EPCs高表达CD34、CD133和VEGFR2;在铺有基质胶的96孔培养板中可形成血管样结构。第5代48 h后贴壁细胞特异性表面抗原CD31呈阳性表达。2.MTT比色法结果显示与对照组相比较,50%EPC-CM组和100%EPC-CM组MSCs增殖能力明显增强,且呈浓度依赖性(P<0.05)。3.MTT比色法和Ed U荧光标记法结果显示与对照组相比较,实验组MSCs的增殖能力在72 h后显著增强(P<0.05);处于DNA合成期的细胞比例也显著增多(P<0.01)。结论:利用差速贴壁法可同时分离纯化扩增MSCs和EPCs,EPC-CM能促进MSCs的增殖,EPCs在与MSCs非接触共培养时能促进MSCs的增殖。