目的:探究骨唾液酸蛋白(Bone Sialoprotein,BSP)对乳腺癌细胞增殖、浸润转移的影响及其在乳腺癌骨转移过程中的作用和可能的机制。方法:1.通过构建 BSP 敲降(Knochdown BSP,KDBSP)或过表达(Overexpression BSP,OEBSP)的乳腺癌细胞株MCF-7/MDA-MB-231表达载体,使用CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)和Transwell实验验证BSP敲降或过表达对乳腺癌细胞株MCF-7/MDA-MB-231增殖、浸润转移的影响。2.Western Blot(WB)检测BSP对乳腺癌细胞株MCF-7/MDA-MB-231浸润转移相关因子蛋白表达的影响。通过免疫共沉淀检测BSP与TGFβR1,TGFβR3及BSP 与 VDR(Vitamin D Receptor,VDR)是否存在相互作用。3.构建MC3T3-E1-Sub14成骨细胞和RAW264.7破骨细胞培养体外模型,碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色鉴定成骨细胞形成,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRAP)染色和WB检测破骨细胞相关因子蛋白水平鉴定破骨细胞形成。4.构建乳腺癌细胞株 MCF-7(CTL/KDBSP/OEBSP)和 MDA-MB-231(CTL/KDBSP/OEBSP)与成骨/破骨细胞的共培养模型。ALP染色和鬼笔环肽标记的细胞骨架染色检测乳腺癌细胞(KDBSP/OEBSP)对成骨细胞的增殖分化的影响。TRAP染色和WB检测破骨细胞相关因子蛋白表达检测乳腺癌细胞(KDBSP/OEBSP)对破骨细胞增殖分化的影响。结果:1.敲降或者过表达BSP影响乳腺癌细胞MCF-7/MDA-MB-231的增殖和浸润转移。敲降BSP能明显抑制两株乳腺癌细胞增殖和浸润转移能力,而过表达BSP则能促进乳腺癌细胞的增殖和浸润转移,且BSP对MCF-7细胞的的增殖影响要明显于MDA-MB-231,但促进MDA-MB-231细胞的浸润转移能力高于MCF-7细胞。2.BSP 能影响 MCF-7/MDA-MB-23 1 细胞中 P-SMAD3、SMAD4 及 VDR 蛋白表达水平,免疫共沉淀实验检测发现,BSP与TGFβR1,TGFβR3存在明显的相互作用。同时,BSP也能够和VDR相互结合。3.ALP染色阳性结果表明成功诱导成骨细胞体外模型,TRAP染色和CTSK、MMP9、OPG蛋白表达结果表明成功诱导破骨细胞体外模型。4.乳腺癌细胞与前成骨细胞共培养会抑制前成骨细胞的增殖分化,ALP染色结果表明,过表达BSP的乳腺癌细胞对前成骨细胞破坏的作用要明显于敲降BSP和野生型的乳腺癌细胞。乳腺癌细胞与分化中后期的成骨细胞共培养,鬼笔环肽标记的成骨细胞骨架染色结果则无明显变化。乳腺癌细胞与破骨细胞共培养实验发现,与野生型或敲降BSP的乳腺癌细胞相比,过表达BSP的乳腺癌细胞与破骨细胞共培养,TRAP染色的多核破骨细胞体积要小或没有明显增加。结论:敲降BSP抑制MCF-7/MDA-MB-231细胞的增殖和浸润转移,过表达BSP则促进MCF-7/MDA-MB-231细胞的增殖和浸润转移。BSP影响乳腺癌细胞株MCF-7/MDA-MB-231增殖、浸润转移可能通过TGFβ信号通路或者直接结合VDR发挥作用。乳腺癌细胞株MCF-7/MDA-MB-231骨转移过程中,BSP对成骨细胞和破骨细胞增殖分化影响程度不同,但都破坏了成骨细胞与破骨细胞动态的平衡,从而促进了乳腺癌细胞的骨转移。