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鸭甲肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHAV)能引起雏鸭爆发鸭病毒性肝炎,其具有发病急、病程短、传播迅速、病死率高等特点,临床上主要表现为食欲减退、神经症状、突然死亡和肝脏肿大出血,又称歪脖病。目前几乎遍布世界各个养鸭国家和地区,给养鸭业带来了较大的经济损失。DHAV可分为DHAV-1、 DHAV-2和DHAV-3三个基因型。本研究主要针对DHAV-1的VP2. VP4基因分别进行了分子特性分析、原核表达和基于两种蛋白的间接ELISA检测方法的建立等研究,主要结果如下：1.Ⅰ型鸭甲肝病毒VP2、VP4基因的生物信息学分析和原核表达根据本试验室GenBank中提交的1型鸭甲肝病毒H株(登录号JQ301467.1)序列及专业的蛋白的切割位点预测软件NetPicoRna V1.0分析获得DHAV-H VP2、VP4基因序列,大小分别为543bp.225bp,分别编码181、75个氨基酸,分子量分别约为20.6KDa和7.7 kDa,VP2、VP4分别含有4个和1个N-豆蔻酰化位点、3个和1个N-糖基化位点、均含有3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,抗原位点较多。经RT-PCR扩增、T克隆和亚克隆,成功构建了原核表达重组质粒pProEx-HTb-VP2和pET32c(+)-VP4,分别转化到宿主菌BL21,经表达条件优化,得出在37℃、0.2mmol/L IPTG诱导8h,VP2重组蛋白可在宿主菌中以包涵体形式大量表达,经切胶纯化得到较纯的VP2重组蛋白。在37℃、0.6mmol/L IPTG诱导4h,VP4重组蛋白可在宿主菌中以可溶性形式表达,经Ni2+NTA柱纯化得到纯度较高的VP4重组蛋白。两种重组蛋白均与能被兔抗DHAV-1血清识别,具有很好的反应原性。2.基于VP2、VP4重组蛋白Ⅰ型鸭甲肝病毒的ELISA方法的建立分别以纯化的VP2、VP4重组蛋白为包被抗原并对包被条件、封闭条件、血清孵育条件、酶标抗体孵育条件及显色时间等的优化,分别建立了基于VP2、VP4重组蛋白的ELISA检测方法。结果显示,以VP2重组蛋白为包被抗原的ELISA最优检测条件为：以2.713μg/ml (100μl)的VP2重组蛋白4℃包被过夜,以5%脱脂奶粉作为封闭液37。C封闭1h,血清1：40稀释于37℃孵育2 h,HRP标记的兔抗鸭IgG以1：2000稀释于37℃孵育2h,TMB显色10 min为最佳检测条件,确定的阳性阈值为0.359。以VP4重组蛋白为包被抗原的ELISA最优检测条件为：以3.375μg/ml (100μl的VP4重组蛋白37℃3h后4℃过夜包被,以1%脱脂奶粉作为封闭液37℃封闭1h,血清1：80稀释于37℃孵育2h,HRP标记的羊抗鸭IgG以1：1600稀释于37℃孵育0.5 h,TMB显色30 min为最佳检测条件,确定的阳性阈值为0.203。建立的两种ELISA方法具有良好的特异性、重复性及灵敏度,与Ⅰ型鸭甲肝病毒为包被抗原的ELISA检测方法的符合率较高,分别为91.1%和70.5%,可用于DHAV-1血清抗体的检测。