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目的通过兔肌肉损伤模型,观察理筋手法对兔颈后肌静力性损伤的防治作用机制。方法选用日本大耳朵兔63只,随机分为三组,即空白组(21只)、模型组(21只)、防治组(21只),三组又分别分为三个动态观察组(即20天、40天、60天组)。除空白组外,其余兔均采取颈椎前屈固定法造模。防治组在每天造模结束后施以理筋手法,直至60天观察结束;模型组在每天造模后不予任何处理。在整个造模周期每隔20天设置一个动态观察点,观察防治效果和中枢镇痛相关指标。1、防治效果:(1)局部体表温度变化:采用红外热成像系统检测各组兔颈部温度;(2)肌组织病理:经HE染色法观察颈部肌组织病理变化;(3)组织超微结构:透射电镜观察肌组织超微结构变化;(4)肌细胞骨架蛋白:免疫组织化学法检测desmin和α-actin的表达。2、中枢镇痛作用:酶联免疫吸附法(ELISA)检测:(1)P物质(Substance P,SP),(2)β-内啡肽(Beta Endorphin,β-EP),(3)脑啡肽(Enkephalin,ENK),(4)八肽胆囊收缩素(Cholecystokinin-8,CCK-8)。实验数据采用SPSS22.0统计软件进行分析。结果1.局部体表温度变化:在三个动态观察点均观察到,模型组颈部损伤部位体表温度显著高于空白组(P<0.05);防治组颈部损伤部位体表温度显著低于模型组(P<0.05)。2.HE染色:对各组取材的骨骼肌进行HE染色观察发现,空白组60天内,肌纤维排列整齐,形态规整。模型组损伤后大部分肌纤维排列紊乱、扭曲、疏松,并伴有炎性细胞的浸润,且在20天、40天、60天三个观察点,随时间轴兔颈后肌损伤程度逐渐加重。防治组在三个动态观察点发现,肌纤维损伤程度明显减轻,肌纤维形态较规整,排列较整齐,少见炎性细胞的浸润,与模型组相比,三个动态观察点的损伤程度都相对较轻。3.透射电镜观察:空白组肌原纤维排列致密,横纹清晰,明暗带交替出现,线粒体结构完整。模型组动态观察的60天内,肌原纤维损伤逐渐加重。20天时,肌原纤维部分排列紊乱,肌丝扭曲,呈现出局灶性病变;40天时,肌原纤维部分排列紊乱、疏松,肌丝溶解,断裂,可见大量空泡,线粒体嵴溶解、消失;60天时,肌原纤维排列紊乱、疏松,肌丝扭曲、断裂,肌节破坏,线粒体嵴溶解,线粒体数量减少。防治组在60天观察期内,三个观察点均比模型的损伤程度轻。总体表现为肌原纤维排列致密,整齐,少见肌丝扭曲,偶见空泡的出现,线粒体结构完整,整体骨骼肌纤维结构损伤并不明显。4.肌细胞骨架蛋白免疫组织化学法检测结果各组α-actin表达的平均光密度值(AOD):组间比较:三个观察点,模型组AOD值显著低于空白组(P<0.05);20天观察点,防治组AOD值显著高于模型组(P<0.05),且与空白组无明显差异(P>0.05);40天、60天观察点,防治组AOD值显著高于模型组(P<0.05),防治组与空白组比较,仍显著低于空白组(P<0.05)。组内比较:模型组三个观察点之间无显著性差异(P>0.05);防治组三个观察点之间无显著性差异(P>0.05)。各组desmin表达的平均光密度值(AOD):组间比较:三个观察点,模型组AOD值均显著低于空白组(P<0.05);20天、40天观察点,防治组AOD值显著高于模型组(P<0.05),且与空白组无显著性差异(P>0.05);60天观察点,防治组AOD值显著高于模型组(P<0.05),但仍与空白组之间有着显著性差异(P<0.05)。组内比较:模型组三个观察点之间无显著性差异(P>0.05);防治组三个观察点之间无显著性差异(P>0.05)。5.酶联免疫吸附法检测结果SP结果:兔颈段脊髓和下丘脑SP含量,三个观察点模型组SP含量均显著高于空白组(P<0.05);三个观察点防治组SP含量均显著低于模型组(P<0.05)。模型组40天兔颈段脊髓SP含量显著高于模型组20天、60天(P<0.05);模型组下丘脑SP含量在三个观察点无明显差异(P>0.05);防治组60天下丘脑SP含量显著低于防治组20天、40天(P<0.05);防治组颈段脊髓SP含量在三个观察点无明显差异(P>0.05)。β-EP结果:兔颈段脊髓和下丘脑β-EP含量,三个观察点模型组β-EP含量均显著低于空白组(P<0.05);防治组40天兔颈段脊髓β-EP含量高于模型组40天(P<0.05);防治组60天兔下丘脑β-EP含量高于模型组60天(P<0.05);防治组60天下丘脑β-EP含量显著高于防治组20天、40天(P<0.05);防治组20天下丘脑β-EP含量显著高于防治组40天(P<0.05);模型组兔颈段脊髓及下丘脑β-EP含量在三个观察点之间无明显差异(P>0.05)。ENK结果:兔颈段脊髓和下丘脑ENK含量,三个观察点模型组ENK含量均显著低于空白组(P<0.05);除下丘脑60天观察点外,三个观察点防治组ENK含量均显著高于模型组(P<0.05)。防治组20天、40天兔颈段脊髓及下丘脑ENK含量均显著高于防治组60天(P<0.05);模型组兔颈段脊髓及下丘脑ENK含量在三个观察点无明显差异(P>0.05)。CCK-8结果:兔颈段脊髓和下丘脑CCK-8含量,三个观察点模型组CCK-8含量均显著高于空白组(P<0.05)(除下丘脑60天观察点外);20、40天观察点,防治组颈段脊髓及下丘脑CCK-8含量均显著低于模型组(P<0.05),且与空白组无显著性差异(P>0.05)。模型组20天兔颈段脊髓CCK-8含量显著低于模型组40天、60天(P<0.05);模型组60天兔下丘脑CCK-8含量显著低于模型组20天、40天(P<0.05);防治组60天兔颈段脊髓CCK-8含量显著高于防治组20天、40天(P<0.05);防治组40天兔下丘脑CCK-8含量显著高于防治组20天、60天(P<0.05)。结论1.理筋手法早期防治能够有效减轻局部肌组织病理结构和超微结构的损伤,降低受损部位体表温度,缓解静力性负荷对骨骼肌的损伤程度。2.理筋手法的防治作用机制可能与手法激活肌纤维骨架蛋白desmin、α-actin的表达,促进细胞骨架形态修复有关。3.理筋手法还可通过对中枢疼痛递质SP、β-EP、ENK、CCK-8的调节,来达到一定的防治作用,且早期防治作用显著。